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Laracroftit
Nuovo Arrivato

arabidopsis
Città: Sassari


37 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 09:55:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Laracroftit  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Laracroftit Invia a Laracroftit un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao,scusate l'ignoranza,ma ho un dubbio..ieri ho avuto una discussione cn un ragazzo che insisteva che RT-PCR sta per Real Time PCR,io sapevo invece che erano due tecniche diverse,ma nn ricordando bene il funzionamento della Real Time nn sono riuscita ad essere convincente
potete essermi d'aiuto?

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(Albert Einstein)

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 10:11:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao!
La RT-Pcr sta per retrotrascrizione (di Rna)...è quella tecnica che ti consente di fare i cDna partendo da un pool di Rna.
La Real Time Pcr è una PCR quantitativa: ha lo scopo, cioè, di quantizzare il Dna presente nel tuo campione.
Se fai una ricerca sul forum trovi tanti post su questo argomento, oppure:
http://it.wikipedia.org/wiki/Real_time_PCR
http://it.wikipedia.org/wiki/RT-PCR

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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Laracroftit
Nuovo Arrivato

arabidopsis

Città: Sassari


37 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 11:06:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Laracroftit  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Laracroftit Invia a Laracroftit un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok,ora mi è più chiaro,grazie!
anche se leggendo le informazioni su wikipedia nn sembra x niente semplice..bisogna utilizzare un macchinario apposito?

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 11:29:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per la real time intendi?
Sì, c'è un macchinario apposta che essenzialmente è un grosso termociclatore (cioè il macchinario che usi per fare le PCR) accoppiato ad un detector di fluorescenza, il tutto controllato da un computer.
In pratica poi non è difficile da usare, aggiungi i reagenti ai campioni, metti le provette nella macchina e premi RUN! (beh, ok, c'è qualcosina più di questo da fare, ma non è comunque difficile)

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Laracroftit
Nuovo Arrivato

arabidopsis

Città: Sassari


37 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 12:37:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Laracroftit  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Laracroftit Invia a Laracroftit un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
e quale potrebbe essere lo scopo della quantificazione del dna?un esempio...

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cin
Utente Junior

ptero

Prov.: Padova
Città: Padova


558 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 13:25:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per l'RNA serve a vedere come si comportano i geni che stai studiando, ovvero se variano o meno in presenza o in assenza di un qualcosa che tu hai messo o tolto. Oppure più semplicemente vuoi vedere qual'è l'espressione di un determinato gene in un determinato tessuto.
Per il DNA non so.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 13:28:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ad esempio, prendi due gruppi di cellule, uno lo tratti con la sostanza X e l'altro no.
Estrai l'RNA, fai una retrotrascrizione e ottieni il cDNA e poi fai una realtime (cioè PCR quantitativa) per un certo gene.
Il risultato ti dirà se il trattamento con X (a quel dosaggio e per quella certa durata di tempo) aumenta, diminuisce o lascia invariata la trascrizione di quel gene.

Vedi anche:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3648 e links all'interno.

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 19:53:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da cin

Per il DNA non so.


Io la uso su RNA ma a quanto ne so sul DNA serve ad es. per quantificare la carica virale (su DNA virale) oppure si usa anche per gli organismi OGM! Ma non ne so molto!

x Laracroftit:
molti usano erroneamente il termine RT-PCR per denominare la real time che se se non sarebbe corretto!

Tutte la informazioni che vuoi le trovi comunque nei link che ha indicato chick!

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Crick82
Utente Junior



139 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 22:14:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Crick82 Invia a Crick82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Solitamente da quel che so, la Real time PCR si utilizza per quantizzare i trascritti e non il DNA.
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 23 maggio 2007 : 01:01:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si l'uso più frequente è sicuramente la quantizzazione dei trascritti, ma in alcuni casi (come ho detto prima), si usa per il DNA!!! So per certo che alcuni laboratori lo usamo per quantizzare le copie di DNA virale.
Sono un po' stanca per cercare qualche link, ma se cerchi "real time" e "quantizzazione DNA" li trovi!

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Crick82
Utente Junior



139 Messaggi

Inserito il - 23 maggio 2007 : 02:51:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Crick82 Invia a Crick82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In effetti non volevo negare ciò che ha detto GFPina, volevo solo dire che frequentemente si utilizza per la quantizzazione dei trascritti. Sicuramente si utilizza anche per la quantizzazione del DNA virale.


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