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 digestione preparativa del vettore ricombinante
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emi24
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Inserito il - 15 novembre 2009 : 00:44:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emi24 Invia a emi24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao,
qualcuno di voi saprebbe dirmi se in una digestione preparativa (in cui digerisco circa 15 microgrammi di DNA con 0,5-0,6 unita' di enzima per microgrammo di DNA overnight)si usa anche RNAsi? Se si,approssimativamente quanta RNAsi si utilizza e per quanto tempo si fa agire???
vi ringrazio...

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 01:28:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io non l'ho mai usata, perchè teoricamente il tuo metodo di estrazione
del DNA dovrebbe prevederne l'uso a monte, in modo da ottenere DNA
purificato, che è l'unico substrato "utile" per una digestione preparativa.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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emi24
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40 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:14:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emi24 Invia a emi24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hai ragione...mi hai fatto riflettere e sono andata a controllare il protocollo di estrazione per Midi-prep e l'RNAsi è inclusa nella soluzione di risospensione.Il dubbio mi era sorto perchè stavo pensando in parallelo alla digestione analitica dopo una Mini-prep e prima di eseguire una Midi-prep.
Ti ringrazio.
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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:20:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Comunque buona norma sarebbe far correre una lane di DNA purificato
non digerito, per controllare che non ci siano "strisciate" di RNA
tra i pesi molecolari più bassi, e quindi verificare che l'azione
dell'RNAasi sia stata efficace e non vi sia ulteriore contaminazione
da RNA (io lo faccio solo cone le midiprep e con le maxiprep).

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emi24
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40 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2009 : 15:42:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di emi24 Invia a emi24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
wauuu....le maxiprep mi mancavano!!! (diciamo che ho ancora da imparare )
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