ciao ragazzi, sono Viola e ho appena iniziato la tesi in biologia molecolare. domani devo allestire una real time per valutare l'espressione di 5 geni in cheratinociti murini. l'unica cosa che mi è stato detto è che per ogni campione il Volume Finale di reazione è 20 microL di cui: 10 di Cyber 0,4 di Forward 0,4 di Reverse 10 di cDna. ora il problema è che mi hanno confuso le idee riguardo i cDna... si tratta di diluizioni e cose varie di cui nn ho capito niente e non so a chi chiedere...aiutatemi!
Direi di chiedere alla persona che te l'ha detto...
Ad ogni modo probabilmente ti avrà detto di usare varie diluizioni del tuo cDNA (es. 1:5, 1:10, 1:20) per ottimizzarne la quantità per gli esperimenti successivi.