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gtca
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15 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2014 : 18:02:44

Durante il processo di ligazione, se si vuole aumentare la probabilit� che il frammento si leghi con i vettore � consigliato, con un enzima fosfatasi,eliminare il P al 5' nel vettore, in modo che questo non si richiuda su se stesso.
Mi chiedo per�, mancando il P al 5', come possa quindi il frammento legarsi al vettore...
Come fa?

Grazie, (sperando che prima o poi qualcuno risponda... :) )

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 22 giugno 2014 : 18:56:43

Penso proprio che le due molecole di DNA vengano ligate mediante il 5' fosfato derivante dall'inserto. Cos� rimane per� un nick in corrispondenza del sito di ligazione nell'altro strand dato dalla mancanza dal 5' fosfato del vettore. Di fatti per� inserto e vettore sono ora un'unica molecola e i nick verranno riparati una volta che le cellule batteriche verranno trasformate con il prodotto di ligazione.