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ilarip
Utente Junior
Prov.: Bologna
Città: Bologna
432 Messaggi |
 Inserito il - 09 ottobre 2008 : 15:39:12
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salve.....
in laboratorio sto lavorando sulle colture cellulari 2 cose però nn mi sono perfettamente chiare:
dopo aver lavato le cellule con PBS uso tripsina che mediante la sua azione proteolitica è in gtrado di staccare le cellule l'una dall'latra giusto?? ...
ecco io dopo questo passaggio mi perdo..
cioè è giusto dire che in seguito devo inattivare la tripsina poichè avendo aggiunto il siero l'azione proteolitica mi distrugerebbe le proteine del siero.Dopo va centrifugato
é giusto?? o mi sono persa qualcosa??
poi altra cosa:come colorante io utilizzo il Typan Blue sull'azione di questo ho trovato pareri discordanti cioè la Professoressa che mi segue mi ha detto che questo colorante colora le cellule morte mentre un altra Dottoressa mi ha detto che questo colorante agisce su entrambe le cellule(vive e morte) con la differenza che le cellule morte intrappolano dentro di se il colorante mentre quelle vive lo rivesano all'esterno
grazie a tutti per le eventuali risposte
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Ho imparato.. .che le opportunità non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che è meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
 Inserito il - 09 ottobre 2008 : 17:37:54
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ciao ilarip. per quanto riguarda la tripsina, è un proteolitico che si estrae da pancreas porcino, taglia quelle proteine che mantengono le cellule attaccate l'una all'altra o su un supporto, tipo la plastica delle petri o il vetro. però alla lunga risulterebbe essere dannosa per le cellule quindi va inattivata. per inattivarsa si usa il siero. questo è il motivo per cui prima di incubare con try si fa un lavaggio in PBS per rimuovere tutte le tracce di siero contenute nel terreno di coltura, altrimenti l'enzima non funzionerebbe. a questo punto si raccoglie tutto, terreno con siero, try e cellule e si centrifuga, permettendo alle cellule di pellettare e di essere risospese nel terreno.
il trypan invece è un colorante delle cellule necrotiche. che io sappia, non entra nelle cellule sane e non viene riversato (è la prima volta ch elo sento  ), ma solo in quelle necrotiche (in quelle apoptotiche no), colorandole in blu.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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ilarip
Utente Junior
Prov.: Bologna
Città: Bologna
432 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2008 : 00:49:54
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grazie Iside
per la questione del colorante magari ritornerò a chiedere al mio professore...
grazie mille  |
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frau_frosch
Utente Junior
Città: Boston
225 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2008 : 14:24:57
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| Confermo la risposta di Iside sul trypan ;) |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 10 ottobre 2008 : 20:28:05
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giusto per aggiungere una piccola cosa: aggiungi terreno con siero perchè questo contiene inibitori dell'enzima, tra cui cationi bivalenti. infatti la tripsina la usi con EDTA che chela i cationi bivalenti.
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Discussione |
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uso della tripsina e colarante Typan Blue
Didattica e Relazioni
