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Moloney
Nuovo Arrivato
111 Messaggi |
 Inserito il - 16 ottobre 2008 : 15:31:16
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Ciao a tutti!
Vorrei sapere alcune cose sulle cellule staminali neuronali.
Crescono in adesione?
Qual è il mezzo di coltura e ci sono fattori di crescita specifici? Esistono dei saggi di differenziamento in vitro e GFs che orientano verso lineages specifici?
Avete idea di quali marker controllare per testare il differenziamento?
Poi qualche domanda piu' teorica: quali sono le cellule terminalmente differenziate verso le quali può svilupparsi la staminale neuronale?
Vi ringrazio per l'aiuto, sono piuttosto in alto mare ed è anche piuttosto urgente
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Simona84
Utente Junior
Città: milano
131 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2008 : 19:49:41
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http://stemcells.nih.gov/info/scireport/2001report.htm
prova andare su questo link. c'è la possibilità di scaricare un report sulle cellule staminali fatto dall'NIH. nella sezione Adult Stem Cell c'è un capitoletto dedicato alle cellule staminali neuronali magari ti può servire!
ciao! |
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Moloney
Nuovo Arrivato
111 Messaggi |
Inserito il - 17 ottobre 2008 : 12:37:55
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Citazione:
Messaggio inserito da Simona84
http://stemcells.nih.gov/info/scireport/2001report.htm
prova andare su questo link. c'è la possibilità di scaricare un report sulle cellule staminali fatto dall'NIH. nella sezione Adult Stem Cell c'è un capitoletto dedicato alle cellule staminali neuronali magari ti può servire!
ciao!
Grazie, è un link molto utile.
Tuttavia molti dei miei problemi rimangono insoluti: ad esempio, a livello operativo, le concentrazioni da utilizzare dei GFs (e quali utilizzare), la possibilità di monitorare il differenziamento di queste cellule attraverso markers in citofluorimetria o con altre tecniche (ad esempio, per le HSCs esiste il saggio in metilcellulosa) |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2008 : 14:18:32
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Citazione:
Messaggio inserito da Moloney
le concentrazioni da utilizzare dei GFs (e quali utilizzare)
I markers di differenziamento sono tantissimi: dalle neurotrofine (NGF, BDNF etc.), al GDNF, al FGF... sulle concentrazioni specifiche ti direi che dipende dal paper che vai a leggere. In alcuni casi non si va neanche a comprare i GFs, le NSCs vengono messe in co-coltura con cellule che producono i GFs dove differenziano.
Citazione:
Messaggio inserito da Moloney
la possibilità di monitorare il differenziamento di queste cellule attraverso markers in citofluorimetria o con altre tecniche
Anche qua i markers sono molti: prova a cercare qualcosa su NeuroD, nestin e NeuN per incominciare. Come tecniche innanzitutto si può osservare la morfologia delle cellule o le loro proprietà di adesione o elettriche. Per rilevare dei marker ci puoi fare un'IF ma le cellule naturalmente muoiono. Se vuoi complicarti la vita si può fare pure dei transgeni per il marker e poi sortarli al citofluorimetro per avere una popolazioni pura.
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Moloney
Nuovo Arrivato
111 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2008 : 15:28:48
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Citazione:
I markers di differenziamento sono tantissimi: dalle neurotrofine (NGF, BDNF etc.), al GDNF, al FGF... sulle concentrazioni specifiche ti direi che dipende dal paper che vai a leggere. In alcuni casi non si va neanche a comprare i GFs, le NSCs vengono messe in co-coltura con cellule che producono i GFs dove differenziano.
Anche qua i markers sono molti: prova a cercare qualcosa su NeuroD, nestin e NeuN per incominciare. Come tecniche innanzitutto si può osservare la morfologia delle cellule o le loro proprietà di adesione o elettriche. Per rilevare dei marker ci puoi fare un'IF ma le cellule naturalmente muoiono. Se vuoi complicarti la vita si può fare pure dei transgeni per il marker e poi sortarli al citofluorimetro per avere una popolazioni pura.
Bene, grazie! Ma per queste tecniche delle proprietà di adesione ed elettriche non è che avresti un paper? Scusa, ma sono molto in panne, sto soffocando di articoli e ancora non ho trovato niente di decente su concentrazioni (per le quali non ho la minima idea) e questi saggi che hai citato tu! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2008 : 18:56:42
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io ho lavorato con cellule staminali tumorali da glioblastoma e le condizioni colturali sono le stesse usate per le NSC, bFGF (10 ng/ml), EGF (20 ng/ml), insulina (5 ug/ml) e il B27 senza vitamina A dell'Invitrogen (50X), un supplemento che espande le NSC senza indurre differenziamento. Questi fattori vengono aggiunti a medium DMEM F12 + 0,4% di BSA, 1% PenStrep e 1% L-Gln. Per ogni ml di terreno sono 1 ul di bFGF ed EGF, 10 ul di insulina e 20 ul di B27.
Per testare il differenziamento ho usato nestina (che è marker tipico staminale perciò diminuisce nelle cells differenziate) GFAP per il differenziamento gliale, B-III-tubulina per quello neuronale e MO4 per quello oligodendrocitario. |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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elly_
Utente Junior
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Didattica e Relazioni
