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Trimy
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
 Inserito il - 24 ottobre 2008 : 18:44:34
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Ciao!Sono iscritta da un pò a questo sito e ho sempre letto con grande interesse alcune discussioni, ora ho bisogno io di un consiglio : ho cominciato da poco a lavorare coi microRNA, estrendoli da campioni tissutali. La quantizzazione allo spettrofotometro ha indicato sempre valori di Assorbanza a 260 nm piuttosto bassi (anche se i rapporti A260/A280 e A260/A230 non erano malvagi). Quindi volevo sapere, da chi ha già lavorato coi microRNA, indicativamente i valori di Assorbanza a 260 che aveva ottenuto, ed eventualmente il fattore di diluizione utilizzato. Immagino che la quantità di RNA dipenda anche dal tipo di tessuto che si utilizza, la mia è solo una curiosità per avere un confronto, nella bibliografia non trovo niente di soddisfacente
Grazie e ciao!
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2008 : 16:44:05
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ciao
scusa potresti riformulare la domanda
che ci devi fare con i microRNA?
li devi analizzare come?
e come puoi dire che stai misurando solo l'assorbanza dei microRNA?
isoli solo quelli o il RNA totale?
perche' dipende da cosa devi farci per sapere se la tua assorbanza e' buona anche se bassa
io lavoro con microRNA
ma lavoro con vettori che esprimono microRNA per RNAi
ho usato varie tecniche per vedere se il mio microRNA era presente e non ho mai avuto problemi
ma io isolavo l'RNA totale e poi cercavo il mio microRNA
quindi il valore di assorbanza era dell'RNA totale
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Trimy
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2008 : 17:54:28
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| Ciao miky76, il lavoro che faccio io sui microRNA è diverso perchè devo studiare il profilo di espressione di una serie di microRNA sul campione, i kit che utilizzo mi permettono di isolare l'RNA totale e poi di separare e utilizzare separatamente l'mRNA dai microRNA, quindi l'Assorbanza rilevata in teoria dovrebbe essere solo quella dei microRNA! |
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miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2008 : 12:56:12
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si il lavoro e' diverso
ma sempre dipende come poi analizi il profilo di espressione
a volte l'assorbanza e' bassa
ma la tecnica finziona lo stesso
oppure modifica il kit
se usi filtri
sostituisci il passaggio dei filtri con precipitazione isopropanolo
a -80C
non so che kit usi
ma io per ottenere piu rna o dna se uso kit
li modifico
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Marianna
Utente Junior
146 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2008 : 13:23:25
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Io solo i miR nn li ho mai letti..ho sempre estratto l'RNA totale e letto quello..quindi nn saprei proprio dare un parere in merito! |
Farah |
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