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Miri
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 04 novembre 2008 : 12:47:17
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Avrei bisogno di qualche dritta per eseguire la caratterizzazione dell'attività di un enzima, non ho mai fatto un esperimento pratico e non so come elaborare i dati!
Ho un enzima e il suo substrato cromogenico specifico, la cui degradazione a seguito dell'attività enzimatica viene letta a 405nm. L'enzima è ad una concentrazione nota (60nM) e ho 7 diverse concentrazioni del suo substrato specifico (0.3mM a 3 mM). L'esperimento viene condotto con un lettore di micropiastre perciò posso leggere ogni 30sec, per ogni concentrazione di substrato, l'assorbanza.
Come faccio a trovare la velocità (per ogni concentrazione di substrato) per poi costruirmi il grafico dei doppi reciproci e ricavare Vmax e Km?
Grazie mille per l'aiuto!!!!
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bledarit
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2008 : 00:14:34
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Messaggio inserito da Miri
Avrei bisogno di qualche dritta per eseguire la caratterizzazione dell'attività di un enzima, non ho mai fatto un esperimento pratico e non so come elaborare i dati!
Ho un enzima e il suo substrato cromogenico specifico, la cui degradazione a seguito dell'attività enzimatica viene letta a 405nm. L'enzima è ad una concentrazione nota (60nM) e ho 7 diverse concentrazioni del suo substrato specifico (0.3mM a 3 mM). L'esperimento viene condotto con un lettore di micropiastre perciò posso leggere ogni 30sec, per ogni concentrazione di substrato, l'assorbanza.
Come faccio a trovare la velocità (per ogni concentrazione di substrato) per poi costruirmi il grafico dei doppi reciproci e ricavare Vmax e Km?
Grazie mille per l'aiuto!!!!
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bledarit
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2008 : 00:17:52
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Citazione:
Messaggio inserito da Miri
Avrei bisogno di qualche dritta per eseguire la caratterizzazione dell'attività di un enzima, non ho mai fatto un esperimento pratico e non so come elaborare i dati!
Ho un enzima e il suo substrato cromogenico specifico, la cui degradazione a seguito dell'attività enzimatica viene letta a 405nm. L'enzima è ad una concentrazione nota (60nM) e ho 7 diverse concentrazioni del suo substrato specifico (0.3mM a 3 mM). L'esperimento viene condotto con un lettore di micropiastre perciò posso leggere ogni 30sec, per ogni concentrazione di substrato, l'assorbanza.
Come faccio a trovare la velocità (per ogni concentrazione di substrato) per poi costruirmi il grafico dei doppi reciproci e ricavare Vmax e Km?
Grazie mille per l'aiuto!!!!
allora quella che stai cercando e una formula...trovi tutto quello che ti serve su biochimica speciale ultima ediz.di PICCIN |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 10 novembre 2008 : 10:40:29
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Ciao Miri e benvenuta su moleculalrab
cerchero' di darti una mano ...
Allora, tu hai diverse [S],mentre la concentrazione enzimatica è uguale in tutti i campioni,
quando avrai messo il substrato,leggendo con lo spettrofotometro vedrai la tua curva esponeziale crescere in funzione del tempo ed in base alla quantita' di substrato messo ok?
Ora assumiamo che la nostra km sia 2 mM ,le curve che vedrai al di sotto di questa concentrazione saranno basse e ci metteranno del tempo in piu' per raggiungere la Vmax... mentre superando questa concentrazione si arrivera' prima alla Vmax e a questo punto la conversione del subrastrato a prodotto in funzione del tempo sara' sempre la stessa....ora conosci la tua Vmax ,nei tuo grafici ti tracci un asintoto, e la meta' della Vmax del tuo grafico corrispondera' alla km.
Per le conversioni matematiche della formula di Henry michaelis Menten...sono solo rapporti matematici
Cmq..io non so come sono impostati i tuoi grafici ...io dalla teoria che ho studiato ho dedotto questo,se c'e' qualocsa che non va possiamo ragionarci insieme  |
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