Colture in assenza di CO2

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prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Citt�: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2008 : 15:31:14

sto da poco lavorando su 2 linee cellulari tumorali (ricavate da carcinoma mammario) mda-mb-157 e mda-mb-231 (catalogo ATCC, HTB-24 e HTB-26)

ecco i link per le specifiche

http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCCNum=HTB-26&Template=cellBiology#aPropae4f8

http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCCNum=HTB-24&Template=cellBiology

alla voce "propagation" appare per entrambe "Incubate cultures at 37C without CO2"

purtroppo per� gli incubatori che ho a disposizione hanno la CO2 settata al 5% e le flask hanno il tappo con filtro areato

le cellule per� crescono egregiamente e quindi non mi sono posto il problema pi� di tanto, forse effettivamente a lungo andare immagino possa cambiare qualcosina a livello metabolico

agli incubatori non posso modificare la conc. di CO2 perch� sono comuni all'intero laboratorio, che mi consigliate?

dalle specifiche sembra che la CO2 non sia opzionale, ma vada proprio tolta...

life happens

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2008 : 21:14:09

Usa flask senza tappo areato!

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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 08:45:32

concordo appieno. usa le fiasche senza filtro nel tappo. visto pero che crescono cosi bene con la Co2 magari prima di passarle totalmente alle fiasche senza filtro prova a fare una prova tenendone un po in entrambe le fiasche. ciaooo

prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Citt�: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:59:32

ma il tappo chiuso non da limitazioni all'apporto di O2?

ma poi com'� che richiedono l'assenza di CO2? sono comunque cellule tumorali di origine epiteliale...

life happens

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 15:13:47

ottima domanda quella dell'O2... la Co2 al 5% nell'incubatore non serve direttamente alle cellule ma solamente per creare il sistema tampone all'interno del terreno. infatti la Co2 si sciglie nel terreno e forma acido carbonico il quale assieme al carbonato stabilizza il pH. e mo'?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 15:22:38

Ma un semplice incubatore (= stufetta) a 37�C non ce l'avete?

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 07 novembre 2008 : 09:05:27

non � sterile la stufetta.

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 07 novembre 2008 : 11:07:20

Citazione:
Messaggio inserito da mattia.dinunzio

non � sterile la stufetta.

Certo ovvio che la stufetta non � sterile, ma le cellule sono chiuse dentro la flask che ha il tappo con filtro!

Altrimenti non potresti neanche tirarle fuori dalla cappa perch� fuori non � sterile!

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 07 novembre 2008 : 12:19:16

Touch�

prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Citt�: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2008 : 14:09:45

in realt� un incubatore a 37 esisterebbe...ma dentro ci sono un sacco di schifezze (pezzi chirurgici in collagenasi/dispasi, batteri trasformati) quando lo apri senti perenne odore di rape

torno a chiedermi come mai � richiesta l'assenza di CO2

life happens

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 08 novembre 2008 : 14:14:27

No, ok, se hai dentro batteri non metterci le cellule!

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prandoFDA
Nuovo Arrivato

Prov.: Brescia
Citt�: Botticino

17 Messaggi

Inserito il - 20 novembre 2008 : 14:58:16

su osservazione di mattiba ho trovato la risposta se ancora interessa

The media recommended by the ATCC� for these cells is Leibovitz's L-15 medium which does not contain sodium bicarbonate to act as a buffer for the carbonic acid that would normally form in the presence of CO2.
Furthermore, if the cells are cultured in Leibovitz's medium and grown in the presence of CO2, it will cause reduced cell viability.

life happens

STEFY86VA
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 25 novembre 2008 : 16:48:13

Ciao a tutti, allora se ti pu� essere utile nei lab di microbiologia di tutti gli ospedali per le colture in assenza di CO2 inseriscono le piastre in un contenitore a tenuta stagna e inseriscono all'interno delle bustine apposite che hanno il compito di assorbire la CO2 contenuta, rendendone cos� l'ambiente privo,e le mettono in un normale termostato.Per i batteri funziona alla grande, linee cellulari non so!

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