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Ignacio Celestino
Nuovo Arrivato



9 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 14:28:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ignacio Celestino Invia a Ignacio Celestino un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti :

Sto mettendo appunto una real time relativa per studiare l'espressione di proteine virali in cellule infette. Uso SYBR GREEN. Ora mi sono disegnato i primer con un programma, mi hanno consigliato di testarli visto che sono nuovi.

Ora per vedere se il mio sistema è efficiente: La prima volta è più opportuno usare diverse concentrazioni dei primer tipo 100uM, 50uM e 25uM oppure mantenere la loro concentrazione costante e magari diluire il campione???

Grazie mille e buon lavoro!!!!

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 15:00:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh per testare i primers io proverei diverse concentrazioni di primers, magari con due o tre diluizioni di un campione (sempre lo stesso).
Però che concentrazioni hai scritto???
Intendevi nM (nano molare)?
Perchè 100uM è tantissimo! E' la soluzione madre che fai quando scogli i primers!
In genere la concentrazione di primers che si usa in una PCR è 100-500nM (= 0.1-0.5uM)
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Ignacio Celestino
Nuovo Arrivato



9 Messaggi

Inserito il - 06 novembre 2008 : 16:06:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ignacio Celestino Invia a Ignacio Celestino un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie della risposta, per quanto riguarda la concentrazione dei primer hai ragione mi sono sbagliato parto da 400nM!!!

Domani mattina ci provo allora...vediamo che cosa ne viene fuori

Ciaooo e grazie ancora GFPina.


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