Trasfezione HEK 293

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HEK
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1 Messaggi

Inserito il - 29 novembre 2008 : 14:08:03

ciao a tutti!!! mi servirebbero sapere delle informazioni su come trasfettare cellule di HEK 293....

ho fatto varie prove utilizzando la trasfettina (cio� liposomi...ma le cellule stanno sempre male...

sul datasheet mi dice di utilizzarne 40 microlitri ma non va ben per niente....
qualcuno mi saprebbe dire di pi�? grazie

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 29 novembre 2008 : 20:04:06

Le 293 si trasfettano molto bene, anche con il calcio cloruro. Oppure bastano pochi ul di Lipofectamine (10-15...ora non ricordo preciso).
Se non riesci a trasfettarle...non so...
mi viene da pensare che andrebbero cambiate le cellule perch� sono invecchiate, oppure possono essere contaminate da micoplasma...

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

paolo865
Utente Junior

Prov.: Como
Citt�: Olgiate Comasco

262 Messaggi

Inserito il - 30 novembre 2008 : 08:36:36

Io trasfettavo le HEK in piastre da 10 (800000 cells/dish) cos�:

-50 microL di CaCl2 2.5M

-15 gamma di DNA plasmidico

-H2O sterile a un volume finale di 500 microL

Poi aggiungi ai complessi Ca/Dna a 500 microL di tampone HeBs 2X pH 7.05

Dopo 30' RT trasfetti e poi cambi il terreno dopo 5-6 ore

A me cos� si trasfettavano molto bene, l'unico consiglio che ti do � stai attento al passaggio in piastra delle cellule perch� dopo una 15 di passaggi cominciano a dare rogne. Ciao