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greace
Nuovo Arrivato
Città: ancona
43 Messaggi |
 Inserito il - 02 dicembre 2008 : 20:07:07
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ciao a tutti ragazzi
sto studiando il refolding e la purificazione di proteine ricombinanti da corpi di inclusione di E.Coli..
i primi passaggi mi sono abbastanza chiari..parlo quindi dell'isolamento dei corpi di inclusione del lavaggio e della solubilizzazione con i detergenti..
per quanto riguarda il refolding della proteina solubilizzata ho qualche problemino a capire come funziona..sò che è problematico perchè le proteine vorrebbero riaggregarsi e quindi bisogna trovare un compromesso tra fare un procasso di rinaturazione veloce (che non dia tempo di riaggregare) e un processo che sia sufficientemente lento per ottenere la corretta conformazione proteica. So ke le tecniche che si possono usare a proposito sono diluizione dialisi o cromatografia per gel-filtrazione.
inoltre il mio prof. nello specifico vuole sapere come si procede nel caso in cui le proteine in questione presentano dei ponti disolfuro..........
in questo caso si deve operare a diluizione elevate ed aggiungere tioli e agenti riducenti??
in più ho un file..in inglese..dove c'è scritto che i metodi più comuni per promuovere l'ossidazione durante il refolding sono:
ossidazione in seguito all'esposizione all'aria, in presenza di tracce di ioni metallici
e l'aggiunta una miscela di forme riducenti (RS-) e ossidanti (RSSR) di reagenti a basso peso molecolare...
vorrei avere una conferma da voi..
qui vi lascio l'allegato in inglese...
grazie mille a tutti per l'aiuto..
Allegato:  refolding1.pdf
10,5 KB
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greace... |
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refolding proteine ricombinanti da E.Coli
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