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Cikobiotech
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
 Inserito il - 30 dicembre 2008 : 18:40:33
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Salve a tutti volevo che chiedere qual'è la tecnica per introdurre all'interno di una proteina naturale il tag d'istidina.
Questo significa più in generale come creare una proteina ricombinati.
Scusate l'imprecisione per quanto riguarda : proteine ricombinanti.
Intendevo una proteina con sequenze amminoacidiche diverse.
Sto preparando l'esame di biologia molecolare e tecniche di laboratoirio
,stranamente sapere queste cose non rientra nel programma(purtroppo) ,però sono assetato di conoscenza
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 30 dicembre 2008 : 18:58:22
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Ovviamente devi partire a livello di sequenza genica e non fare altro che fondere il tuo gene (o cDNA) con una sequenza codificante istidine.
Il tutto deve essere fiancheggiato da siti di restrizione che permetteranno l'introduzione in un vettore di espressione. |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:07:44
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Intendi forse come ottenere una proteina leggermente diversa dal normale?
In questo caso, la mutagenesi sito specifica può essere la risposta: http://it.wikipedia.org/wiki/Mutagenesi_sito_specifica |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Cikobiotech
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:07:52
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Io volevo sapere appunto come avviene questa "fusione". Poniamo il caso il voglia inserire il tag istidine
all'N-terminale o al C-terminale. Come si dovrebbe procedere?
Sono ben accetti link, pdf e quant'altro. |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:19:47
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Capito la tua domanda!
Da quel che so, esistono ormai vettori già con la sequenza di His inserita al C-t o all'N-t. |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:27:57
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Ti ha già risposto Luis, infatti esistono dei vettori apposta che contengono la sequenza di His al loro interno e tu non fai altro che "inserire" il tuo frammento (cDNA) in questo vettore.
Questo è un esempio di uno di questi vettori:
(trovato assolutamente a caso facendo una ricerca in internet)
Ce ne sono veramente tantissimi, per ogni necessità.
Un altro metodo è quello di disegnare primers che contengano una coda di istidine e amplificare il cDNA con quelli.
Cercando una bella immagine da postare ho trovato anche la spiegazione di Wikipedia, mi sembra semplice e chiara: Adding Polyhistidine Tags
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Cikobiotech
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:35:41
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Bhè diciamo che con il disegnino sei stata molto più chiara  .Grazie ancora penso che per quest'anno abbia esaurito domande. Auguroni di buon anno. |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 19:57:44
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Importante è sopprimere il codone di stop della proteina di partenza e "spostarlo" più a valle dopo il tag...Per farlo puoi usare dei primers particolari che si appaiano come nello schema...Il FLAG è un tag...Il primers antisenso si appaia al suo 5' al 3' del gene, poi si crea un loop in presenza della zona da inserire, e infine si appaia col suo 3' al gene...La sequenza che crea il loop viene inserita nel gene a partire dal secondo ciclo di PCR...E' uno shema della mia tesi...
Immagine:
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Cikobiotech
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
Inserito il - 30 dicembre 2008 : 20:06:45
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| Magnifica spiegazione Schuldiner86 |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 31 dicembre 2008 : 10:58:50
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| Grazie chick, è che avevo fatto tutto di corsa... |
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tag istidina : etichettare una proteina
Didattica
