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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2009 : 20:49:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragà ho un problemino che da ieri mi sta facendo perdere la testa ovvero
il trasferimento delle proteine dal gel al filtro non avviene. La cosa che mi preoccupa è che sul filtro non si trasferisce nemmeno il marcatore. Ricapitolando tutte le fasi ripeto esattamente la stessa procedura che ho sempre eseguito, non ho cambiato alcuna soluzione, la membrana che uso è sempre la stessa.
Non riesco a capire quale possa essere la causa, apparentemente faccio tutto bene:
-ho pensato all'ordine con cui allestisco il blotting;
-il buffer di trasferimento lo preparo come al solito;
-uso un voltaggio di 120Volt per 45';

Dopo ho messo il gel in Comassie e decolorato ma non c'è presenza di proteine.
Secondo voi quale può essere la causa del mancato trasferimento??

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2009 : 20:56:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Dopo che hai fatto il trasferimento vedi ancora le proteine sul gel?

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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 08 gennaio 2009 : 21:19:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si chick, sul gel vedo chiaramente il marcatore, stamane ne ho caricati 2, e sul gel erano visibili entrambi quindi non credo il problema sia nella corsa

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2009 : 00:23:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sinceramente, visto che non sei un novellino e di Western Blot ne hai fatti, mi sembra stano pensare che sia un problema di come hai agito!
L'unica cosa che mi viene in mente al momento, come controllo è provare a mettere una membrana anche dall'altra parte del gel! Anche se, se hai fatto tutto come al solito e non hai invertito gli elettrodi non vedo perchè si dovrebbe blottare al contrario!
Ma di fatto le proteine sul gel non ci sono più, sulla membrana neanche... da qualche parte dovranno pur essere finite!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2009 : 08:43:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Oppure prova con un'altra camera/generatore di corrente.

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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2009 : 10:07:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
stamattina provo a cambiarer il generatore...

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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2009 : 13:50:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
difatti, stamattina ripensandoci mi è tornato in mente il fatto che la corsa ieri era durata più del previsto ovvero 2 ore precise mentre normalmente dura al max 1ora e 30minuti quindi ho pensato di cambiare la porta dei cavetti ed infatti non solo la corsa è durata di meno ma il trasferimento è riuscito in quanto visibili sul filtro i marcatori ed anche le proteine dopo la colorazione al rosso ponceau.
Insomma ho perso 2 giorni di lavoro per una stronzata (scusate il linguaggio).
Cmq grazie ragazzi
Ciao

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2009 : 15:07:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Eheh, non ti preoccupare, fa parte della vita di laboratorio! Ti troverai altre volte in queste situazioni, te lo assicuro!

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