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mari11
Nuovo Arrivato

Prov.: Catania


14 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2006 : 13:41:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari11  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di mari11 Invia a mari11 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!
la marcatura enzimatica come consente la rivelazione?
è necessaria la presenza di un substrato nel mezzo di reazione che si trasforma in un prodotto colorato o fluorescente?
quando mi viene detto (x es) che la fosfatasi alcalina catalizza l'eliminazione di un gruppo fosfato la rivelazione come si fa?
e con la perossidasi che succede?
mi fate capire?

e la differenza con gli immunodosaggi amplificati che usano la fosfatasi alcalina dove sta?

mamma mia qst biochimica applicata... troppe cose e nessun concetto che viene approfondito.. a volte mi sembra di fare libera interpretazione !

help me please..
mari

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2006 : 00:05:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si, hai qualcosa che fa fluorescenza o colore.
Ad es. esistono substrati che vanno da giallo a rosso (o qualcosa di simile) x la fosfatasi alcalina e per la perossidasi ci sono composti che emettono fluorescenza.

Purtroppo al momento non mi ricordo i nomi dei substrati se vuoi posso cercare.

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Ra1D
Utente Junior

giro-Ra1D

Prov.: Bergamo
Città: Treviglio


174 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2006 : 00:23:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ra1D Invia a Ra1D un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Eccoti un paio di copia-incolla da mie vecchie relazioni in cui c'era la fosfatasi alcalina.

Citazione:

La fosfatasi alcalina è un enzima che catalizza l’idrolisi di monoesteri del fosfato nella seguente reazione: R-O-PO3H- + H2O -> R-OH + H2PO4-
Le fosfatasi alcaline sono le fosfato idrolasi che hanno attività massima ad un pH relativamente alto (> 7.0).
L’attività della fosfatasi alcalina viene determinata con un metodo spettrofotometrico in continuo. Il migliore substrato è il 4-nitrofenilfosfato, che è un substrato artificiale e cromogenico e in vitro viene idrolizzato dalla fosfatasi alcalina a 4-nitrofenolo, un composto che in ambiente alcalino sviluppa una colorazione gialla. Ciò consente di seguire l’attività enzimatica, registrando la comparsa del 4-nitrofenolo liberato nell’unità di tempo alla lunghezza d’onda di 400nm.


Con la perossidasi invece c'è un substrato chemioluminescente.

...e vicinissimo al mio sapere si accampa la tenebra della mia ignoranza...
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mari11
Nuovo Arrivato

Prov.: Catania


14 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2006 : 15:48:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mari11  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di mari11 Invia a mari11 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie chick x la disponibilità ma l'esempio di Ra1D è sufficiente!


grazie anche a te Ra1D!

alla prox
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