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BromuroDiEtidio
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 04 febbraio 2009 : 18:31:16

Ciao a tutti.
Sono in crisi..allora vi spiego il mio problema...
Sono tesista in un laboratorio di Biol.Molecolare. Preparo ogni giorno ormai 6-7 gel di agarsio al 2% per PCR e RT. Quando per� carico i miei campioni il mio marker(di solito carico 2microlitri di marker e 2 di Loading Buffer+ un tot di H2O) "non corre", rimane bloccato nel primo pozzetto dove l'ho caricato.

Voi cosa ne pensate?
GRAZIE

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 04 febbraio 2009 : 18:44:10

Succede anche se lo metti in un altro pozzetto?

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GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 04 febbraio 2009 : 18:49:10

Ma solo il marker non corre o anche i campioni?

BromuroDiEtidio
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 17:31:25

Oggi ho provato a caricarlo sul 2� pozzetto.Ho usato solo 1 microlitro....ha corso un po di pi� ma niente di eclatante!
Anche i campioni corrono poco purtroppo.
Sono quasi certa che il problema non sia tanto il marker quanto proprio il gel.I miei colleghi dicono che il gel ,secondo loro, � perfetto e anche loro sono un p� confusi.
Che frustrazione!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 18:13:06

Hai provato a controllare il pH del TAE o TBE?
Dovrebbe essere attorno 8-8,3

Se fa il gel qualcun altro succede la stessa cosa?

BromuroDiEtidio
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 18:33:54

No non ho controllato il ph...� una buona idea per� PURTROPPO succede solo a me.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 18:37:28

Prova a (in ordine sparso):

* cambiare agarosio
* cambiare TAE/TBE (o controllarne il pH come dice GFPina)
* cambiare il generatore
* aumentare il voltaggio

EDIT: se succede solo a te, cerca di capire cosa fai/usi tu che gli altri non fanno/usano.

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BromuroDiEtidio
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 18:48:13

Grazie.Segur� i tuoi consigli e speriamo bene!

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1912 Messaggi

Inserito il - 05 febbraio 2009 : 21:31:31

puo' essere che sia una stupidaggine quella che sto dicendo .....e se provi a diluirlo di piu' il marker? nel senso che magari la percentuale di glicerolo e' troppo alta
facci sapere

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