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 PCR- RFLP come funziona?
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kiaretta
Nuovo Arrivato

kiaretta1


32 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 14:46:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiaretta Invia a kiaretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sicuramente è una domanda stupida, ma che mi sta creando qualche problema.
Come funziona questo tipo di PCR?
Faccio la PCR normale, ottengo l'amplificato e poi inserisco in provetta gli enzimi di restrizione che mi taglaino in siti specifici, ma come faccio a indentificare un eventuale SNP?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 22:40:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh dal nome RFLP = Restriction fragment length polymorphism (polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione)
sono polimorfismi che alterano un sito di restrizione, se è normale c'è il sito di restrizione e l'enzima taglia, se è mutato non c'è più il sito di restrizione e quindi l'enzima non taglia, avrai bande di lunghezza diversa!

Ovviamente con una PCR-RFLP puoi analizzare solo polimorfismi RFLP, non altri polimorfismi!
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Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 23:09:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

Beh dal nome RFLP = Restriction fragment length polymorphism (polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione)
sono polimorfismi che alterano un sito di restrizione, se è normale c'è il sito di restrizione e l'enzima taglia, se è mutato non c'è più il sito di restrizione e quindi l'enzima non taglia, avrai bande di lunghezza diversa!



Oppure l'opposto, se è normale nn c'è il sito e la mutazione lo crea, in ogni caso avrai bande di lunghezza diversa visibili nel gel elettroforetico.


"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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kiaretta
Nuovo Arrivato

kiaretta1



32 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2009 : 16:09:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kiaretta Invia a kiaretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie a GFPina e Gabriele!!
esame passato egregiamente con 29!
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