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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 22 febbraio 2009 : 11:05:55
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salve a tutti! stavo studiando approfonditamente le coltutre cellulari. per l'isolamento delle singole cellule si può utilizzare il metodo automatico del sorting, ma nn riesco a capirne il principio. qualcuno sa darmi una breve e semplice spiegazione? grazie a tutti...
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 17:01:10
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ragazzi insomma proprio nn volete darmi una mano.....e io piangiooo ueueueue! vi prego... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 17:35:40
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Non ti è chiaro come funziona il sorting in generale o non ti è chiaro come puoi usare il sorting per isolare le cellule da mettere in coltura? |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2009 : 18:07:58
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Ciao Mary,
io conosco il sorting in Citofluorimetria, è una tecnica per isolare popolazioni di cellule, ora io non so se tu hai studiato il citofluorimetro..
Si marcano cellule di interesse con fluorofori ad esempio Ab coniugati FITC verso CD34+ le cellule poi passano "in fila indiana" in un flusso dove ogni cellula, in accordo con il detector per la fluorescenza, viene caricata positivamente... Il sorting lo hai quando le piastre caricate negativamente attirano la tua cellula caricata positivamente nella provetta... Comunque faccio prima a farti vedere la figura del principio fisico del cell sorting in citofluorimetria..
http://www.steve.gb.com/images/science/fluorescent_cell_sorter.png
Ciao |
www.tlbspazio.it
Tecnici di Laboratorio Biomedico Lorenzo Nardi |
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 24 febbraio 2009 : 17:35:44
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per chick allora nn mi è kiaro il sorting in generale.e poi vorrei una spigazione in più per sul soting per isolare le cellule da mettere in coltura. per aureus grazie della spiegazione pero il tuo link nn si apre o almeno a me nn me lo fa aprire nn so xke! grazie cmq! |
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 26 febbraio 2009 : 17:07:15
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vabbe ...grazie lo stesso... |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 21:40:37
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in breve aureus ti ha risposto, marcando una popolazione cellulare con un certo fluoroforo le cellule positive ( o meglio le goccioline di liquido in cui si trovano le cellule) assumono una carica elettrica che permette di separarle dalle altre, convogliandole attraverso dei tubi fino alla provetta che ti permette di raccoglierle in condizioni di sterilità. Queste cellule possono pertanto essere messe in coltura, il che vuol dire che se hai una sottopopolazione anche molto poco espressa (es. 0,1% del totale), ma parti da un buon numero di cellule, puoi riuscire ad ottenere un quantitativo di cellule che esprimono il marcatore di tuo interesse sufficiente a dare una coltura cellulare, a fare dei saggi molecolari, immunoistochimica, insomma il sorting ti permette di avere un quantitativo di cellule (quasi) pure per il marcatore d'interesse Ovviamente molto dipende dalle cellule di partenza, se ci sono degli aggregati il laser fa fatica a discriminare tra una cellula marcata e una no e questo va a discapito della purezza o del quantitativo di cellule che riesci ad ottenere. La stessa popolazione cellulare che metti in coltura comunque non sarà mai pura al 100%, perciò una coltura putativamente negativa per un marcatore col passare del tempo potrà riesprimerlo, e viceversa una popolazione arricchita per un marcatore col passare del tempo potrà perderlo, o diminuirne l'espressione |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 28 febbraio 2009 : 17:27:05
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grazie grazie grazie! sapete...vi ammiro tanto x tutto quello ke sapete! |
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 11:01:06
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ah cmq oltre al FACS esiste anke il MACS... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 11:06:41
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Sì, ma il MACS è una cosa differente (immunomagnetic cell sorting). E' essenzialmente una cromatografia che sfrutta particelle magnetiche, tra l'altro credo che MACS sia solo un nome commerciale.
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 15:38:32
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anche FACSmassì facciamo un po' di pubblicità comunque la separazione su colonnina con le biglie è ugualmente utile per questo scopo, ovviamente se si parla di grandi quantitativi di cellule e/o di popolazioni presenti in percentuali infime fare la separazione manualmente su colonnina è un lavoraccio immane, ma esiste un macchinario (l'autoMACS, già che vogliamo restare in tema)in grado di separare le cellule marcate da milioni di altre non marcate, con un arricchimento anche di 10000 volte di cellule rare come as esempio le staminali
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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MARYANGY
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 17:40:42
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visto quante cose si scoprono! |
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