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aero
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Inserito il - 24 febbraio 2009 : 19:56:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di aero Invia a aero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, è da tempo che leggo le discussioni di questo forum, ma solo ora mi sono iscritta. Non è molto che mi occupo di biologia molecolare, quindi scusate se i miei quesiti a molti sembreranno banali ma ho bisogno di capire se c'è differenza, ed eventualmente qual'è, tra anti-RNasi e inibitori delle ribonucleasi.
Il fatto è che dopo aver lavorato per un pò con il DNA, vorrei provare l'RT-PCR per valutare l'espressione di alcuni geni batterici in condizioni di stress, quindi sto cercando di allestire un protocollo e di acquistare tutti i reattivi necessari, ma non riesco a capire se per proteggere l'RNA dalla degradazione ad opera delle RNasi devo usare le anti-RNasi o gli inibitori delle ribonucleasi.Sapete inoltre consigliarmene alcuni di una ditta particolare?
Grazie mille.

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 25 febbraio 2009 : 00:33:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh generalmente si utilizzano gli inibitori delle RNasi, per anti-RNasi sinceramente non capisco cosa intendi!

Comunque quando fai il cDNA a partire da RNA utilizzi nella miscela inibitori delle RNasi, alcune retrotrascrittasi contengono già gli RNasi-inhibitor e quindi non c'è bisogno di aggiungerli a parte. Pressoché tutte le ditte che vendono reagenti per biologia molecolare vendono inibitori delle RNasi.

Poi esistono altri prodotti per lavorare in ambiente "RNasi free", ad es. RNasi-zap uno spray da spruzzare sul bancone e sulle pipette... e varie precauzioni per lavorare con RNA.

Ambion era una ditta molto mirata su prodotti per RNA, poi è stata acquistata da Applyed che è stata acquistata da Invitrogen, comunque dicono che i prodotti sono gli stessi!

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aero
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9 Messaggi

Inserito il - 25 febbraio 2009 : 21:38:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di aero Invia a aero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille GFPina!!
Il dubbio mi è venuto perchè, dovendo richiedere dei preventivi, ho cercato gli inibitori delle RNase e proprio nel sito dell'AMBION mi si è aperta una pagina dove con codici diversi erano indicati questi inibitori e tra gli altri prodotti anche le ANTI-RNase per cui, avendo poca esperienza in merito, sono entrata in crisi anche perchè leggendo le specifiche dei due prodotti non ho capito bene in che cosa sono diversi e soprattutto quale fosse il caso di ordinare per la mia RT-PCR... Comunque dopo aver letto la tua risposta sono più tranquilla e ordinerò gli inbitori delle RNase, dopo aver controllato che non siano già forniti con la transrittasi inversa.
Ancora GRAZIE!

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 26 febbraio 2009 : 00:17:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh ho guardato sul sito della Ambion, quello che loro chiamano anti-RNase è semplicemente un RNase-inhibitor modificato. La differenza è che lega non-covalentemente le RNasi e che non ha bisogno di DDT al contrario dell'RNase Inhibitor. Sostanzialmente non credo cambi poi molto, magari è più efficiente... ma tutti hanno sempre fatto RT con RNasi Inhibitor. Ovviamente più si va avanti sviluppano prodotti più evoluti e più efficienti, ma non è che quelli vecchi non vadano bene.
Diversi sono invece gli altri prodotti che ti dicevo per lavoare in ambiente "RNAsi free".
Comunque il sito della Ambion ha di buono che ci sono anche delle pagine in cui spiegano le "basi" e a cosa servono i vari prodotti, magari puoi leggerteli un po'.
Qua trovi tutti gli articoli sulle "basi": The Basics - General Articles (Ambion)
poi se fai un giro in Technical Resources trovi varie cose interessanti.

Se hai altre domande chiedi!

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aero
Nuovo Arrivato



9 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2009 : 18:02:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di aero Invia a aero un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie tante GFPina!!
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