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BimbaJLo
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
 Inserito il - 27 febbraio 2009 : 00:02:29
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DISPERAZIONE IN ATTO.... Come si calcola la variaz. di ENTALPIA in esperimenti (ho i grafici) di dicroismo circolare usando vant'hoff? Mi spiego meglio...
Abbiamo fatto esperimenti di dicroismo circolare della denaturazione termica del lisozima,e ci è stato chiesto di usare l'equazione di Vant'Hoff per calcolare la variazione di entalpia della reazione. Ma se non erro per quella equazione ho bisogno della K1 e della K2 che ovviamente non ho!! Come si calcolano?? L'unica cosa che ho è un grafico di dicroismo circolare con ellitticità molare sulle ordinate e la lunghezza d'onda in nm sulle ascisse...Come faccio?? E la temperatura di melting??? GRAZIEEEEEEEe
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lachimica
Utente Junior
Prov.: Pisa
346 Messaggi |
 Inserito il - 27 febbraio 2009 : 10:47:50
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questa è una bella gatta da pelare:
io credo che nella sezione di biologia dovresti trovare maggior aiuto perchè so che questo è un tipo di analisi che si usa in biotecnologia
cmq io ho iniziato a fare un ragionamento che ora ti proporrò,
certo non avendo sotto mano il grafico, non so se porta a qualcosa, ma credo che vali la pensa provare:
....ipotiziamo che l’equilibrio tra la forma nativa (N) e quella denaturata (D) sia descritto da un processo ad un unico stadio:
N <-- --> D
Date le condizioni di equilibrio, e considerata la stechiometria del processo, è possibile scrivere le seguenti equazioni:
concentrazione totale = Ct = [N]+[D]
cost. di equ. = K = [D] / [N]
Considerando la frazione di popolazione di ciascuna specie in soluzione:
f(D) = [D]/Ct
f(N) = [N]/Ct
è possibile riscrivere le prime due equazioni nel modo seguente:
f(D)*Ct + f(N)*Ct = Ct
cioè
1) f(D) + f(N) = 1
e
2) K = f(D) / f(N)
I valori delle costanti di equilibrio si ottengono dalla relazione:
K(T) = K(Tm) * exp[(dH/R)*(1/Tm – 1/T)]
Dove K(Tm) = Keq alla temperaura nel punto di flesso =
= fm(D) / fm(N)
Dove
[teta] = [teta]1*f(N) + [teta]2*f(D)
con [teta]1 = l’ellitticità della specie N e [teta]2 = elletticità della specie D
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lachimica
Utente Junior
Prov.: Pisa
346 Messaggi |
 Inserito il - 27 febbraio 2009 : 10:49:31
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(copia incolla dalla risposta da me data in un altro forum...) |
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BimbaJLo
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 21:10:42
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| Innanzitutto GRAZIEEEEEEEEE!!!! Potrei avere un'ulteriore delucidazione?? Cos'è fm in fm(D)/ fm (N)??? E...esattamente, come faccio a calcolare la frazione di popolazione di D ed N dato che non ho nulla, so solo che ho preso 100 microlitri di proteina e portata a 500microlitri e che ho fatto lo spettro CD, valutando a 222nm come varia l'ellitticità molare in funzione della temperatura. E da queste info dovrei calcolare il DH di denaturazione (il prof ha detto tramite vant'hoff). Ti/Vi ringrazio anticipatamente!!!! |
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lachimica
Utente Junior
Prov.: Pisa
346 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 22:39:16
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| non è che puoi postare i grafici? |
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BimbaJLo
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 28 febbraio 2009 : 15:04:52
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| Ciao ho postato i grafici... |
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chick80
Moderatore
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chick80
Moderatore
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BimbaJLo
Nuovo Arrivato
7 Messaggi |
Inserito il - 28 febbraio 2009 : 15:41:04
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ti ringrazio...si ho sbagliato io, scusatemi sono appena iscritta!!
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lachimica
Utente Junior
Prov.: Pisa
346 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 22:54:59
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i numeri non sono molto leggibili, quindi ti spiegp come procedere ma i numeri ce li metti te:
Abbiamo ipotizzato che l’equilibrio tra la forma nativa (N) e quella denaturata (D) sia descritto da un processo ad un unico stadio:
N <-- --> D
Date le condizioni di equilibrio, e considerata la stechiometria del processo, è possibile scrivere le seguenti equazioni:
concentrazione totale = Ct = [N]+[D]
cost. di equ. = K = [D] / [N]
Considerando la frazione di popolazione di ciascuna specie in soluzione:
f(D) = [D]/Ct
f(N) = [N]/Ct
è possibile riscrivere le prime due equazioni nel modo seguente:
f(D)*Ct + f(N)*Ct = Ct
cioè
1) f(D) + f(N) = 1
e
2) K = f(D) / f(N)
[theta]1 = prendi il valore di theta nel tratto lineare in basso a sinistra della curva
[theta]2 = prendi il valore di theta nel tratto lineare in alto a destra della curva
Tm = prendi il valore di T nel punto di flesso della curva
Nello stesso punto, prendi il valore di theta, sarà:
[theta]m = [theta]1*fm(N) + [theta]2*fm(D)
Dove fm è la l frazione di popolazione a Tm
Quindi
fm(N) + fm(D) = 1
metti a sistema e trovi fm(N) e fm(D)
così calcoli K(Tm) = fm(D) / fm(N)
Poi prendi T e theta in un altro punto x lungo il tratto di curva ascendente:
metti a sistema
[theta]x = [theta]1*fx(N) + [theta]2*fx(D)
fx(N) + fx(D) = 1
E trovi fx(N) e fx(D)
da cui K(Tx) = fx(N) / fx(D)
poi trovi dH:
R*[LnK(Tx) -K(Tm)] / (1/Tm – 1/Tx) = dH
Io ripeterei il tutto con un altro punto y e troverei altri due valori di dH combinando y con m, e x con y, così puoi trovare un valore medio su tre misure.
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Variazione entalpia denaturazione
Didattica
