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tiziana1979
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 27 febbraio 2009 : 13:19:50
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Ciao,qualcuno potrebbe spiegarmi da cosa può essere causato lo SMIR nelle bande di migrazione su gel di acrilmmide? Il campione è un estratto proteico (in PBS).
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morgan79
Utente Junior
Prov.: Bari
143 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 14:02:29
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| il marker come é? se é degradato anche il marker é colpa del gel, altrimenti potrebero essere le tue proteine degradate |
il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 16:48:43
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Citazione:
Messaggio inserito da tiziana1979
Ciao,qualcuno potrebbe spiegarmi da cosa può essere causato lo SMIR nelle bande di migrazione su gel di acrilmmide? Il campione è un estratto proteico (in PBS).
lo SMEAR può dipendere anche dal fatto che sono state caricate troppe proteine su gel. in quel caso il marker però non ti dovrebbe dare problemi |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 27 febbraio 2009 : 16:49:51
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| ops scusa mi era sfuggita una cosa...perchè hai proteine in PBS? hai caricato il PBS sul gel? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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tiziana1979
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 21:01:42
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allora, l'estratto l'ho ottenuto attraverso omogeinizzazione con PBS. Ho quindi effettuato la precipitazione con ammonio solfato, la dialisi ed infine la liofilizzazione. Quindi ho risospeso il liofilizzato in PBS. Quest'ultimo l'ho caricato su gel insieme al Sample buffer6X-
Il marker migra bene.
E' possibile che sia la percentuale del gel di acrilammide a non andare bene?
Non ho molta esperienza in questo settore...
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 02 marzo 2009 : 10:31:31
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| cioè? qual è la percentuale? che PM ha la proteina che cerchi? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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tiziana1979
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
 Inserito il - 02 marzo 2009 : 19:10:02
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hai ragione, ho dimenticato a scriverlo...
Allora il gel è al 7,5% e le proteine che dovrei trovare hanno peso molecolare di 26,1 e 19,1KDa.
Oggi ho provato un gel al 12% e credo che dal risultato ottenuto si tratti di degradazione delle proteine estratte. Infatti, i campioni estratti con triton 1% e PBS avevano meno smear di quelli estratti esclusivamentwe con PBS e poi precipitati con Solfato di Ammonio, dializzati e liofilizzati.
Il risultato del liofilizzato era pessimo.
Mi hanno suggerito di estrarre in presenza di inibitori di proteasi e aggiungere al campione prima di caricarlo su gel Triton.
Che ne pensi?
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Discussione |
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cattiva migrazione su gel di acrilammide
Didattica
