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dorlando86
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Inserito il - 04 marzo 2009 : 14:32:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dorlando86 Invia a dorlando86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve secondo voi è possibile utillizare la fret per mettere in evidenza, la co espressione a livello di geni di un ck3 e di un ck34????

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 15:43:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non capisco cosa tu intenda con "co espressione a livello di geni".
PS: non ho idea di cosa siano ck3 e ck34, quindi forse è per quello che mi sfugge!

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 17:25:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho esattamente gli stessi dubbi di chick80 potresti essere più chiaro/a?
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dorlando86
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 17:59:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dorlando86 Invia a dorlando86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Volevo dire la tecnica fret in biologia molecolare puo essere usata per dimostrare la coopresenza di due proteine una citocheratina e un marker??
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Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa


615 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 19:08:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Gabriele Invia a Gabriele un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Direi solo se le due proteine interagiscono tra loro (un marker di cosa?Della citocheratina in questione?) o si trovano cmq moooooolto vicine a livello cellulare.

"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 20:43:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
E ne devi generare delle varianti fuse a proteine fluorescenti e trasfettarle nella cellula se vuoi fare un esperimento di FRET.

E continuo a non capire il "a livello di geni" della tua domanda.

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dorlando86
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 21:32:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dorlando86 Invia a dorlando86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si, allora ragazzi spiegatimi un attimo la tecnica fret, le applicazioni in biologia molecolare.
Io allora, devo dimistrare la co presenza nel dna di cellule digeni che traducono per la citocheratina e per il cd34.Si puo usare la fret!!??!!

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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 22:30:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
No, per quello direi che basta una RT-PCR!

La FRET serve per vedere se due proteine interagiscono.

Vedi http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12057 (verso metà pagina)

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dorlando86
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2009 : 12:18:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dorlando86 Invia a dorlando86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie per le risposte, e ragazzi se voglio vedere se le due molecole la citocheratina e il cd34 interagiscono come posso fare?rispondete per favore grazie mille!!!!ho bisogno di una mano!!!!
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2009 : 13:08:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Io allora, devo dimistrare la co presenza nel dna di cellule digeni che traducono per la citocheratina e per il cd34


PCR

Citazione:
se voglio vedere se le due molecole la citocheratina e il cd34 interagiscono come posso fare


FRET, two hybrid system, surface plasmon resonance, co-IP (?)...

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dorlando86
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2009 : 14:42:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dorlando86 Invia a dorlando86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Come si creano plasmidi per la fret???'
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 08 marzo 2009 : 00:18:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ma sei proprio sicuro di volerti imbarcare in un esperimento di FRET? Innanzitutto hai gli strumenti necessari per farlo es. un confocale, qualcuno che poi sa analizzare i dati etc?

Conta che solo per mettere a punto una tecnica del genere ci vorrebbero dei mesi... sinceramente da quello che scrivi non mi è molto chiaro cosa stai cercando di dimostrare, se la colocalizzazione delle due proteine o la loro interazione... probabilmente io ripenserei un po' meglio agli esperimenti da fare. Ad es. se queste proteine interagiscono perchè lo fanno? Hai un output finale di questa interazione che puoi andare a guardare?

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