Difficolta' nell'estrazione manuale dell' RNA

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FRENC99
Nuovo Arrivato

Prov.: RM
Citt�: Roma

4 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 15:26:55

Salve a tutti sono un laureando in biologia che e' alle prese con l'estrazione manuale del RNA ribosomiale , quella con il Trizol; cloroformio;isopropanolo;etanolo
Ammetto che sono alle prime armi le ultime estrazioni non sono venute malgrado sia certo di aver fatto bene i passaggi, ma colleghi mi hanno fatto notare che per una buona estrazione bisogna avere un pellet cellulare di partenza buono..adesso penso di aver usato pellet troppo piccoli cosi' mi hanno detto.. secondo voi quante cellule minimo dovrei pellettare per un pellet decente da estrazione? In termini di numero ?

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 16:18:47

ciao

ma il tuo RNA e' degradato o estrai poco RNA?

beh dipende anche da che uso devi fare del RNA
se stai cercando di vedere l'espressione di un gene poco espresso
allora devi avere un ottima estrazione di RNA e anche un buon quantitativo di RNA
altrimenti anche se e' un po degradato, si puo' usare benissimo

io non ho mai contato il numero di cellule dalle quali estraggo l'RNA
ma per intenderci... ho sempre avuto una buona resa da cellule confluenti in una P24 (placca da 24 pozzetti)... le cellule che uso sono piccole (DRG o PC12)...

FRENC99
Nuovo Arrivato

Prov.: RM
Citt�: Roma

4 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 19:50:24

Allora non ottengo RNA e' degradato..quando faccio la corsa sul gel ...
Io ho estratto Rna da 4 pozzetti confluenti di un piastra come la tua...penso siano pochi per avere estrazione....

Saretta
Utente Junior

Prov.: Roma
Citt�: Provincia di Roma

263 Messaggi

Inserito il - 04 marzo 2009 : 20:23:10

Dipende dalle cellule e dal'uso che devi farne...in pratica da quanto sono grandi le cellule e quanto RNA ti occorre. Se lavori con poche cellule � ovvio che il pellet � piccolo.
A cosa ti serve questo RNA?

miky76
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2009 : 11:12:56

cia scusa ma nn ho capito la frase

tu ottieni RNA degradato
quindi nn e' il pellet il problema ma come estrai l'RNA

e concordo con saretta... se le cellule sono poce... ottieni poco pellete

ma ti posso assicurare che con cellule normali.... 1 pozzetto di una P24 confluente ti da l'RNA sufficiente per fare un QRT-PCR

quindi io credo sia il tuo protocollo di estrazione
forse sbagli qualche passaggio o metti troppo o troppo poco di una soluzione

cosa fai estattamente?