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Autore Discussione  

reshma
Nuovo Arrivato


Prov.: vr
Città: verona


5 Messaggi
Inserito il - 06 marzo 2009 : 12:48:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di reshma Invia a reshma un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!domandina...io sto facendo trasformazione con pGEM t-easy...però non uso enzimi di restrizione...la domanda è...non sapendo cm sono le estremità del mio inserto...cm fa il pgem ad integrare il mio inserto??il pgem è già aperto di suo?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 06 marzo 2009 : 13:52:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ma non hai il manuale del vettore? Di solito è incluso e c'è spiegato tutto.
Comunque la mappa del vettore e' questa:



Il vettore pGEM è aperto, è tagliato con EcoRV e sono aggiunte delle T al 3'.
Quando amplifichi il tuo frammento utilizzando delle polimerasi tipo la Taq che aggiunge una A al 3' del tuo amplificato questo diventa complementare al vettore e per questo verrà inserito con l'orientamento corretto.

     VETTORE                INSERTO            VETTORE
------------------T  --------------A  ----------------
------------------  A--------------  T----------------


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gilthanas
Nuovo Arrivato

0116_da_CIA



100 Messaggi
Inserito il - 08 marzo 2009 : 19:54:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di gilthanas Invia a gilthanas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
beh non proprio una sola A...in genere ne mette alcune ad entrambe le estremità 3'...
per il resto concordo appieno...
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Patrizio
Moderatore

mago

Città: Barcellona


1912 Messaggi
Inserito il - 09 marzo 2009 : 09:40:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Patrizio  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Patrizio Invia a Patrizio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
reshma potresti dirmi quant'e' grande il tuo inserto e se il clonaggio ti e' venuto facilmente?giusto per curiosità

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