| Autore |
Discussione |
|
|
masisa
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
 Inserito il - 11 marzo 2009 : 16:16:26
|
ciao...ancora io...
qualcuno sa speiegarmi a cosa serve questa soluzione?
l'abbiamo usata in una preibridazione , in un'asperienza di laboratorio che trattava l'ibridazione Southern con una sonda marcata con digossigenina.
Nella soluzione di pre-ibridazione ci sono denhardt's solution, SSC, formaldeide e SDS...
grazie a tutti!!
|
|
|
|
|
miky76
Utente Junior
126 Messaggi |
|
|
masisa
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 11 marzo 2009 : 16:37:31
|
 sono sempre poco chiara nelle mie richieste...cmq si mi serviva sapere a cosa serve.
grazie mille!! |
 |
|
|
Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2009 : 00:36:28
|
Cara Masisa,
se la tua domanda era a cosa serve la soluzione di Denhardt nel Southern, la risposta è stata già data da miky76.
Se non hai capito il messaggio significa che non lo hai letto con attenzione o non ti è chiaro il funzionamento del Southern.
Nel Southern si cerca di identificare una sequenza di DNA attraverso un'altra sequenza di DNA nota e marcata con radioattivo (Probe)
La tua sequenza marcata (Probe) si legherà al DNA bersaglio in maniera complementare e specifica.
In particolare io utilizzavo la denhardt's solution per fare i Southern con oligonucleotidi marcati all'estremità con una chinasi.
Ma se tu mettessi l'oligo marcato (carico negativamente) direttamente a contatto con il filtro di nitrocellulosa (carico positivamente), il tuo oligo sarebbe legato anche dal filtro (legami non specifici) e da proteine varie, oppure ci potrebbero essere dei legami non specifici tra DNA e DNA. Il filtro sarebbe tutto marcato.
La denhardt's solution contiene proteine che occupano tutti i siti positivi della nitrocellulosa evitando che questo leghi il tuo probe... e satura anche tutti i legami non specifici attraverso gli altri polimeri.
Il tuo probe a DNA marcato è in quantità infinitesimali rispetto alle sostanze della denhardt's solution non marcata, quindi non può legarsi a nulla in maniera non specifica.
In condizioni ideali, però, il tuo probe si può legare solo al DNA perfettamente complementare. In questo modo darà la radioattività solo dove c'è la sequenza che vuoi trovare.
In pratica la denhardt's solution serve per...
Citazione:
[...]si usa per evitare che il probe( sonda) si attacchi a siti non specifici
Blocking reagent to help prevent probe binding to open membrane space and non-target nucleic acids.
ovvero... aumentare la specificità del segnale radioattivo verso la sequenza che stai cercando
 |
|
|
| |
Discussione |
|
denhardt's solution
Didattica
