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alej88
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 17 marzo 2009 : 11:00:07

ciao , ho finito il laboratorio biochimico cellulare rivedendo gli apputi mi sono venuti dei dubbi
1) Leggendo una discussione precedente il biorad � uan marca di prodotti quindi sar� il blu di comassi quello usato per il metodo bradford?
2)per calcolare la concentrazione col metodo bradford io calcolo la concentrazione di proteine ma quelle totali all'interno della celllula ? (dato che il giorno dopo abbiamo usato ONPG che dava colorazione gialla)
3) noi abbbiamo usato per il metodo bradford 2 microlitri di lisato cellulare quando lo riporto sulla retta di taratura devo dividere la concentrazione trovata per due dato la retta sta su i 100 microlitri..infatti dopo per calcolare la concentrazioen di estratto proteico ci hanno detto di fare un proprzione per vedere quanto estratto proteico mettere per effettuare il saggio della b galattosidasi?

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 17 marzo 2009 : 13:15:19

Citazione:
1) Leggendo una discussione precedente il biorad � uan marca di prodotti quindi sar� il blu di comassi quello usato per il metodo bradford?

S�, probabilmente hai usato del Coomassie blue prodotto dalla Biorad!

Citazione:
2)per calcolare la concentrazione col metodo bradford io calcolo la concentrazione di proteine ma quelle totali all'interno della celllula ?

Il metodo di Bradford calcola la concentrazione di proteine in un campione, indipendentemente da dove tu abbia preso lo stesso. Se hai fatto un'estrazione totale delle proteine allora misuri quelle totali nelle cellule/tessuto da cui le hai estratte. Se hai fatto una separazione ad es. delle membrane allora misuri solo quelle di membrana. Se parti da sangue allora misuri le proteine circolanti e cos� via.

Citazione:
3) noi abbbiamo usato per il metodo bradford 2 microlitri di lisato cellulare quando lo riporto sulla retta di taratura devo dividere la concentrazione trovata per due dato la retta sta su i 100 microlitri..infatti dopo per calcolare la concentrazioen di estratto proteico ci hanno detto di fare un proprzione per vedere quanto estratto proteico mettere per effettuare il saggio della b galattosidasi?

Non sono sicurissimo di aver capito la domanda...
Ad ogni modo sulla retta di taratura tu hai delle CONCENTRAZIONI note quindi il volume non influenza la tua lettura a patto di non aver diluito in modo diverso i campioni rispetto agli standard.

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alej88
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 17 marzo 2009 : 21:58:57

allora noi abbiamo usato 200 microlitri di lisato cellulare riportato sulla retta di taratura e poi dovevamo preparare il materiale per la b galattosidasi a questo punto dovevamo calcolare quanto esratto proteico prendere dato che non eravamo sicuri di quanto ce n'era
L'estratto andava con onpg e PM2
abbiamo calcolato le concentrazioni (misurate in retta) moltiplicate per i volumi delle burette in cui stavano per ottenere gli mg
� giusto?
i volumi erano diversi tipo
1,8 uM in 120 ml
1.9 in 100