Preparazione proteine per western blot

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Ricciola
Nuovo Arrivato

38 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 09:51:51

ciao amici,
volevo confrontarmi con voi su come preparate le proteine per la corsa elettroforetica per il western blot.

Mi spiego meglio: io per un pozzetto (25 microlitri) preparo una mix con tot microlitri di proteina, sempre 5 microlitri di sample buffer e poi arrivo a volume col buffer di lisi con cui ho estratto le proteine.

L'ultima volta non mi � venuto lo sviluppo (sembrava mi fossi dimenticata Ab ma non � cos�) e durante la corsa ho notato un lieve "rallentamento" nei pozzetti dove avevo caricato pi� buffer di lisi.
Eppure l'actina � venuta....

Perci� mi volevo confrontare con voi....grazie!!!

nyo84
Utente Junior

Prov.: Brescia
Citt�: Piancogno

239 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 10:17:28

ciao..beh..il sample buffer penso sia il Loading Buffer,giusto?e ne usi 5 microlitri perch� presumo sia una soluzione 5X..io per arrivare a volume sinceramente uso acqua distillata con aggiunta di inibitori di proetasi e fosfatasi all'1%..

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...

Ricciola
Nuovo Arrivato

38 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 10:31:58

nyo hai ragione, non sono stata precisa.

cmq direi che ci siamo, nel senso che nel mio buffer di lisi c'� il detergente + inibitori proteasi e fosfatasi

ora ho l'ansia finch� non sviluppo ufffffff

nyo84
Utente Junior

Prov.: Brescia
Citt�: Piancogno

239 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 11:16:23

beh..il detergente secondo me puo� influire sulla corsa per�...

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...

Ricciola
Nuovo Arrivato

38 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 11:52:17

per� prima d'ora non l'aveva mai fatto

nyo84
Utente Junior

Prov.: Brescia
Citt�: Piancogno

239 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2009 : 12:27:35

beh..se hai aumentato le quantit�,penso che una causa possa essere quella...poi magari parto da un presupposto sbagliato io...

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...

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