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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
 Inserito il - 20 marzo 2009 : 16:57:59
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Carissimi,
oggi che è venerdì mi accingo a sviluppare un Southern Blot,
e ho un dubbio che potreste risolvere con la vostra esperienza...
...ora, sul Maniatis (la mia Bibbia da laboratorio) ho letto che per trasferire DNA di grosse dimensioni su Nitrocellulosa è necessario fare un blot di trasferimento attraverso la capillarità ( come i vecchi trasferelli per intenderci)..
...la mia domanda semplice è: perchè posso fare un trasferimento utilizzando il campo elettrico come per le proteine senza perdere o alterare i miei campioni??
Grazie per l'aiuto..
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Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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legolas
Utente
Prov.: Lecce
Città: Trepuzzi
723 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2009 : 18:45:05
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| Trasferisci i frammenti sul filtro di Nitrocellulosa perchè è la pila di tovagliolini di carta assorbente ad aspirarli. Poi vengono trattenuti dalle maglie presenti nella nitrocellulosa. |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2009 : 19:01:10
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Grazzie Legolas,
ma questo lo sapevo già...
...io sto cercando di capire se si può fare un soutern blot trasferendo con l'ausilio dell'elettricità pittosto che per capillarità.. |
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Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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Andrea86
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2009 : 22:08:02
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ciao,
non sapevo che, nel southern, si potesse trasferire il dna sulla nitrocellulosa anche grazie ad un campo elettrico... Ma non ho ancora molta esperienza in laboratorio quindi non ti saprei dire. Cmq con l'elettroforesi si usa un campo elettrico per far migrare il dna e non mi pare che si rovini. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 21 marzo 2009 : 00:40:12
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Certo si può fare! Sopratutto se usi gel di polyacrilamide in cui il trasferimento per capillarità non funziona molto bene.
Qua trovi un po' di informazioni (anche se parla solo di gel di agarosio): Southern blotting
e qua trovi il protocollo: Southern blotting (pdf)
io non l'ho mai fatto, anche se dovrei farlo forse per un Northern, poi magari una volta fatti e collaudati mettiamo i protocolli nella sezione protocolli! 
Se cerchi in pubmed trovi anche articoli interessanti, tipo: Electrophoretic transfer of DNA from gels to filters by using a homemade apparatus.  (peccato che non abbia l'accesso!) |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 23 marzo 2009 : 13:22:14
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Ottima GFPina!
Grazie per i tuoi utili e preziosi consigli!!!
A Presto!
-Lorenzo- |
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Lorenzo Nardi |
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Southern Blot
Didattica
