Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
biotecvet82
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
23 Messaggi |
 Inserito il - 22 marzo 2009 : 16:07:14
|
Salve a tutti, da quasi 2 mesi sto impazzendo con dei cardiomiociti umani messi in contura. Si tratta di una linea primaria, fornita dalla promocell.
Ogni vials contiene 500.000 cellule in un volume di 1mL.
Su queste cellule devo fare delle prove di tossicità di un antitumorale di mio interesse (valuto apoptosi con test annexV al FACS, MTT, microscopia elettronica).
Grosso problema ..sti dannati cardio non ne vogliono sapere di crescere.
Li semino nel loro terreno fornito dalal stessa promocell, ho seguito rigorosamente tutte le loro istruzioni in termine di scongelamento, mantenimento...ma nulla....dopo 2 settimana se mi trovo 1000000 di cellule è un miracolo. Morale..se faccio il test al FACs, dopo trattamento non raggiungo nememno 100000cellule per tubo (me ne servono almeno 100000 a tubo, per condizione, per vedere qualcosa).
Sono passato dal una concentrazione di siero da 5 al 10% ( col 10% sono arrivato a 1000000 di cellule). Stavo pensato di aumentarla ulteriormente, ma nn vorrei avere ulterirori problemi di tossicità .
Qualcuno può darmi qualche consiglio.
grazie a tutti
|
|
|
|
|
gilthanas
Nuovo Arrivato
100 Messaggi |
Inserito il - 23 marzo 2009 : 21:21:17
|
Il, siero lo terrei comunque al 10%....
Proverei ad aumentare il siero al 20% per un pò fino a che non ti crescono meglio...
in genere ci sono linee cellulari che appena scongelate fanno fatica a ripigliarsi dallo stress del conglem/scongelam...ed in quei casi aumentare un pò il siero almeno per i primi passaggi è d'obbligo...
poi dove le hai messe? da che fiaschetta sei partito? T25 o più grossa? spesso può essere anche quello il problema..non metterle subito in uno spazio troppo grosso...se cresceranno bene al massimo le passi prima..
io aumenterei il siero al 20%...prova... |
 |
|
|
Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2009 : 10:39:49
|
ma trovi molte cellule morte? o è solo un problema di crescita? secondo me portare al 20% il siero è troppo, non ho mai sentito di cellule che crescono con così tanto siero, forse esistono, boh 
mi verrebbe da chiederti se l'incubatore funziona... |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
cardiomiociti umani
Didattica
