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Discussione |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
 Inserito il - 31 marzo 2009 : 15:25:34
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Ciao sono meme qlc mi saprebbe dire che calcoli devo fare, mi hanno detto di usare la tripsina 1x della sigma diluita 1:2 in PBS, la concentrazione finale dovrebbe essere 0,25 % di tripsina e 0,1 % di EDTA 
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chick80
Moderatore
Cittŕ: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 15:50:52
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Non capisco la domanda scusa.
Se la devi usare 1:2 diluiscila 1:2 no? (1 ml in 2 ml oppuer 10 in 20 oppure 50 in 100 etc) |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 16:53:15
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Hai ragione, per questo chiedevo consiglio cosa dovrei fare?
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:03:38
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Qlc mi sŕ dire cosa si intende per differenziamento delle caco 2? 
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:05:19
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| Chick80 grazie |
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chick80
Moderatore
Cittŕ: Edinburgh
11491 Messaggi |
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:20:45
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Magari la cosa migliore č chiedere a chi te l'ha detto e ti sta seguendo!
Comunque se la devi diliure 1:2 in PBS fai come ha detto chick80.
Se č giŕ diluita 1:2 in PBS la devi utilizzare cosě com'č.
Per le CaCo2 sono una linea di cellule tumorali derivate da adenocarcinoma del colon umano, possono differenziarsi (come altri tipi cellullari) cioč subire delle modificazioni.
Qua trovi qualcosina: http://air.unimi.it/bitstream/2434/49326/1/RELAZIONE+ATTIVIT%C3%A0+DOTTORATO+1%C2%B0+ANNO.doc.
perň scusa sei in un laboratorio? Non ti hanno dato del materiale su cui studiare? Ti sta seguendo qualcuno? |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:23:10
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Ho 100ml per 12Unitŕ e devo fare una concentrazione da 1X
Cerco di spiegarti meglio dobbiamo aliquotare la tripsina e mi hanno dato questi dati, purtro non ho capito nulla quindi richiederň spiegazioni
grazie |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:25:29
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| Certo che sono seguita in lab..chiedevo per avere maggiori informazioni |
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:32:42
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Citazione:
Messaggio inserito da meme
Ho 100ml per 12Unitŕ e devo fare una concentrazione da 1X
Si ma 1X di per se non vuol dire molto, significa che č la concentrazione di lavoro che utilizzi!
Ad es. se hai una soluzione 10X devi diluirla 10 volte per utilizzarla. (diventa 1X)
Bisognerebbe capire esattamente a che concentrazione č la Tripsina che hai (se č giŕ 0,25 % di tripsina e 0,1 % di EDTA o se no a che concentrazione č) e se devi diluirla con PBS o solo aliquotarla.
Cosě č veramente difficile aiutarti! Se non ti č chiaro qualcosa chiedi di rispiegartelo! 
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:35:19
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| Grazie GFPina |
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chick80
Moderatore
Cittŕ: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:43:46
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La concentrazione dovrebbe essere scritta sulla bottiglietta, in caso contrario leggi il codice prodotto riportato sulla confezione, vai sul sito della Sigma ( www.sigmaaldrich.com ) e inserisci quel codice.
Sulla pagina del prodotto ti danno tutte le info sulla concentrazione oltre a informazioni su come conservare il prodotto. |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:45:11
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| Ho chiesto voglio una concentrazione finale di 0,25% in 1,5ml |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:50:02
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ora ho capito sono 3,75 microlitri su 1,5 ml
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 17:52:47
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siete stati davv gentili a rispondermi considerando che č il mio primo giorno su questo sito, ho fatto bene il calcolo???  |
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 31 marzo 2009 : 18:02:28
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Citazione:
Messaggio inserito da meme
Ho chiesto voglio una concentrazione finale di 0,25% in 1,5ml
Il problema č che per fare i conti devi avere sia la concentrazione iniziale che quella finale che vuoi ottenere!
Altrimenti non puoi sapere come diluirla!
Citazione:
Messaggio inserito da meme
ora ho capito sono 3,75 microlitri su 1,5 ml
Immagino che te l'abbiano detto, allora in questo caso consideri 100% la tua soluzione iniziale e la vuoi fare allo 0,25%.
Quindi: 1,5 ml x 0,25% = 1,5 ml x 0,0025 = 0.00375 ml = 3,75 ul |
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meme
Nuovo Arrivato
Cittŕ: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2009 : 10:56:23
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| Ciao GFPina |
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bububebč
Utente Junior
Prov.: Na
Cittŕ: Napoli
255 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2009 : 18:54:43
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Ragazzi... Buon  d'aprile !
Volevo sapere se qualcuno poteva darmi una mano sulla cross-contaminazione cellulare e sulla detection (decomtaminazione) da micoplasma,ed in particolare sul metodo da usare se si ha a che fare con cellule pretrattate....
Grazie mille a tutti!!!! |
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bububebč
Utente Junior
Prov.: Na
Cittŕ: Napoli
255 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 17:39:32
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
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bububebč
Utente Junior
Prov.: Na
Cittŕ: Napoli
255 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 19:14:11
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Grazie teso che mi hai risposto !! Magari fosse un problema reale che ho in laboratorio.... vedi, io sono picculina  e non ho tanta esperienza pratica in laboratorio e per questo per me, a volte, č ancora piů difficile.... ...
Diciamo che sto studiando le colture cellulari, e i vari metodi di immortalizzazione dei linfociti B da parte di EBV + ottenuto dalla linea cellulare B59-8, e dei linfociti T da parte di HVS ottenuto dall'infezione delle OMK. Ora, la prof. ha detto che la cross- contaminazione č uno dei problemi piů seri a cui possono andare incontro le cellule immortalizzate, e che nei casi piů drastici, non č possibile neanche il recupero,in quanto il meccanismo č molto laborioso... in particolare ha elencato una serie di linee cellulari spacciate per linee tumorali, che in realtŕ erano il risultato di cross-contaminazione con altre lenee continue.... mi puoi aiutare a capire ogni linea cellulare a quale neoplasia corrisponde? perchč sulle slides č tutto siglato e non riesco a individuare sull'albero della linfopoiesi a quale blasto tumorale corrisponde la linea cellulare... nella maggior parte dei casi si tratta di varie leucemie di vari livelli (M0-M7 Oppure da L1-L3) che normalmente so classificare, ma non con queste sigle burbere!!
Grazie infiniteeeeee per l'aiuto!
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 19:23:01
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| devi elencarcele perchč non c'č un criterio distinto per l'assegnazione di un nome ad una linea commerciale..puň anche derivare dal nome di un paziente (come la HeLa, isolata da un cancro della cervice uterina di tale Henrietta Lacks), quindi se la tua prof va per le spicce e vuoi sapere a cosa corrispondono i vari nomi forse ti conviene cercarli sul sito dell' American Type Culture Collection (ATCC), dove ne sono bancate a migliaia |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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bububebč
Utente Junior
Prov.: Na
Cittŕ: Napoli
255 Messaggi |
Inserito il - 02 aprile 2009 : 22:44:17
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Per esempio,la DAMI era spacciata per linea cellulare leucemica acuta mieloblastica M7,mentre invece era cross-contaminata con HEL,ossia LMA M6...
La TI-1 era cross-contaminata con K592,ma a quali blasti corrispondono queste cellule? |
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 aprile 2009 : 19:04:21
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Citazione:
Messaggio inserito da bububebč
Magari fosse un problema reale che ho in laboratorio.... vedi, io sono picculina e non ho tanta esperienza pratica in laboratorio e per questo per me, a volte, č ancora piů difficile.......
Beh crescerai e lavorerai in un laboratorio anche tu! 
Comunque giusto per informazione genarale, visto che ti avevo risposto solo sul micoplasma, č vero la cross-contaminazione č uno dei problemi maggiori che si incontrano lavorando con colture cellulari, sopratutto se si tratta di linee cellulari. Bisogna stare molto attenti ad evitarla!
Poi premesso che io sono grande... ma a me queste cose non le ha mai spiegate nessuno!
Non so molto di leucemie e varie linee cellulari derivate.
Perň credo che l'unica cosa che tu possa fare sia ricercare la varie sigle delle cellule in internet, sul sito ATCC non le trovi tutte.
Ad es. le DAMI come dicevi sono cross-contaminate con le HEL: Early Contamination of the Dami Cell Line by HEL(pdf)
Le HEL ad esempio le trovi qua: HEL cells: a new human erythroleukemia cell line with spontaneous and induced globin expression
Per i vari sottotipi di LMA, ho trovato questo: LEUCEMIAS AGUDAS, interessante anche se č in Spagnolo!!!
Altrimenti puoi chiedere alla Prof. di dirti che cellule sono e da dove derivano!
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bububebč
Utente Junior
Prov.: Na
Cittŕ: Napoli
255 Messaggi |
Inserito il - 04 aprile 2009 : 15:26:05
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Ok Silvi,seguirň il tuo consiglio e dň un'occhiata ai link (grazieeeee milleee  )!
Per quanto riguarda la detection da micoplasma,la Prof.ha parlato invece del "matching" delle colture (o una cosa simile) come metodo da usare nel caso in cui il trattamento con una determinata molecola non ha dato risultati positivi... tu l'hai mai sentito? Io non sono riuscita a prendere appunti su questa parte e mi sono persa qualche punto ....Thank you so much  Smack |
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GFPina
Moderatore
Cittŕ: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 aprile 2009 : 15:55:37
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Citazione:
Messaggio inserito da bububebč
Per quanto riguarda la detection da micoplasma,la Prof.ha parlato invece del "matching" delle colture (o una cosa simile) come metodo da usare nel caso in cui il trattamento con una determinata molecola non ha dato risultati positivi...
 detta cosě penso si riferisca al fatto che se un metodo non funziona in genere si utilizzano piů trattamenti diversi, ma non ci metterei la mano sul fuoco che intendesse quello.
Credo che la cosa migliore sia chiedere a qualcun altro cosa ha scritto sugli appunti, e magari avere dettagli maggiori su cosa ha detto la Prof.
[OT]bello comunque l'avatar di Shan-poo  [/OT] |
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Discussione |
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colture cellulari
Didattica
