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Discussione

Starla
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2009 : 12:11:30

ciao a tutti...

mi chiedevo se qualcuno di voi pu� indicarmi il protocollo migliore x lo sviluppo della BrdU su tessuto crioconservato,tagliato al criostato (12 microm) e montato su vetrino.
E' meglio utilizzare HCl o Dnasi I ?

grazie

byo_gio
Nuovo Arrivato

Prov.: MI
Citt�: Milano

66 Messaggi

Inserito il - 02 aprile 2009 : 16:00:44

Ti posso dire a grandi linee il protocollo che usavo io...

-denaturazione del DNA delle fettine ore a 65 gradi in una soluzione di formamide e SSC 1:1
-lavaggio in SSC
-incubazione a 37 gradi per 30 minuti in una soluzione di HCl 2N in PBS
-lavaggi a temperatura ambiente con una soluzione di Borato 0.5M pH=8.5
-lavaggi con PBS
-blocking
-anticorpo primario
-lavaggi con PBS
-anticorpo secondario
-lavaggi con PBS
-reagenti per la colorazione... qui dipende da cosa usi.

a volte e' necessario un passaggio in piu' per l'inattivazione delle perossidasi endogene, ma penso che in questo caso con l'incubazione a 65 gradi non sia necessaria.
Spero di esserti stato utile...