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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
 Inserito il - 09 aprile 2009 : 23:54:45
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Ciao ragazzi io volevo chiedere se qualcuno mi puo spiegare passo dopo passo con un esempio,come calcolare con excel la concentrazione finale di proteina dopo aver fatto un "Standard Curve" con Lowry assay ed utilizzando l'equazione lineare ricavata.
grazie
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 aprile 2009 : 18:04:51
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Una volta che hai un'equazione tipo:
A = m * C + q
Dove A è l'assorbanza, C la concentrazione, m e q i due coefficienti ricavati dalla regressione lineare.
Puoi esprimere C in funzione di A:
C = (A-q)/m
E sapendo A per il tuo campione ne trovi C |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 10 aprile 2009 : 18:34:26
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ovviamente se hai diverse letture per lo stesso campione ti fai prima la media...
e se hai fatto delle diluizioni per quel campione, alla fine dovrai tener conto del fattore di diluiz che hai usato e moltiplicare... e infine, dividere per il volume che hai usato perl'assay per ottenere la concentraz. riferita all'unita' di volume.
Potrei allegarti un file di esempio, ma ti consiglio di fartelo da solo perche' e' meglio, ti servira' sempre e saprai come farlo e te lo fai come vuoi tu...
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simcrist
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
62 Messaggi |
Inserito il - 10 aprile 2009 : 18:45:11
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Un'altra cosa importante è il calcolo della precisone ed accuratezza.
Dopo aver interpolato infatti a livello quantitativo affinchè il risultato sia valido devi fornire questi parametri.
La precisione è la variabilità espressa in errore% che ottieni eseguendo più volte la stessa misura sullo stesso campione. ad esempio se misure 3 volte la concentrazione di proteine esegui la media e l'errore in % sulla media è la tua precisione.
L'accuratezza è l'errore in % rispetto al valore reale. Ad esempio se tu misuri tre volte lo stesso campione ottenendo una media di 80 ng/mL e la quantità reale è 100 ng/mL hai un errore in accuratezza del 20%.
Citazione:
Messaggio inserito da JULIO
Ciao ragazzi io volevo chiedere se qualcuno mi puo spiegare passo dopo passo con un esempio,come calcolare con excel la concentrazione finale di proteina dopo aver fatto un "Standard Curve" con Lowry assay ed utilizzando l'equazione lineare ricavata.
grazie
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Dr.Simone Cristoni
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H2O
Nuovo Arrivato
32 Messaggi |
Inserito il - 21 aprile 2009 : 11:46:53
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Citazione:
Messaggio inserito da byo_gio
Potrei allegarti un file di esempio, ma ti consiglio di fartelo da solo perche' e' meglio, ti servira' sempre e saprai come farlo e te lo fai come vuoi tu...
cioè prima gli dici che vorresti darglielo e poi gli fai capire che deve arrangiarsi da solo???
ma che modi sono? e se lo facessero a te?
questo è un forum in cui ci si aiuta a vicenda e mi pare che anche tu spesso e volentieri hai chiesto aiuto agli altri.
ciao. |
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 26 aprile 2009 : 21:32:51
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Grazie mille a tutti....byo-gio se mi alleghi un file cm esempio mi fasresti un grosso favore!!! Alcuni colleghi utilizzano nel calcolo anche il correction factor.... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 27 aprile 2009 : 08:37:26
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| Correction factor potrebbe essere la lettura del bianco che sottraggono a tutti i campioni (sempre che non lo faccia già di suo lo spettrofotometro). |
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 01 maggio 2009 : 20:48:28
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| Si grazie,infatti riprovando a fare i calcoli con un esempio ho capito che il cor.fact. è la lettura del bianco che sottraggono ai campioni...ma a volte il calcolo del cor fact nn è semplice perchè dipende dal blank della standard curve e quella dei campioni. Capita di dover muovere la curva per normalizzare i dati... |
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2009 : 10:12:39
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Qualcuno potrebbe allegare un file d'esempio con i calcoli per determinare la corretta concentrazione proteica...vorrei confrontare i miei calcoli con qualcun'altro!!
grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 15 maggio 2009 : 15:50:32
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Si lo so,ma volevo anche un esempio considerando il correction factor da sottrarre ai campioni... e poi verificare che il mio calcolo non è sbagliato!!!
grazie mille... |
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