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zampetta82
Nuovo Arrivato



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Inserito il - 14 aprile 2009 : 16:26:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zampetta82 Invia a zampetta82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Aiutooooo ho un problema con le 293....
Premetto che lavoro con queste cellule da 2 anni circa senza alcun problema...usandole continuamente..
mi assicuro sempre che nn arrivino ad un passaggio troppo avanzato nonostante siano immortalizzate....
Preparo sempre mezzi freschi, aliquotandoli per non ossidarli e non fargli subire troppe variazioni di Temperatura...
ultimamente però le mie cellule (dal piastramento) durano circa una settimana infatti arrivo al lunedì che nonostante non siano a confluenza, si staccano, si gonfiano e espongono una specie di flagello che esce dall'interno....quasi scoppiassero...
non è una tipica infezione batterica (almeno di quelle che io conosco e che inondano la piastra)...
e nn sembrano essere muffe perchè nn vedo delle ife nemmeno a distanza di giorni....
Però osservo ogni tanto delle strane palle blu....(i mostriiii)
ahh...e il mezzo nelle piastre non sembra ossidarsi....
Inoltre quelle che arrivano al lunedì perfettamente a confluenza e che meritano di essere passate per quanto belle e piene siano....
muoiono appena le tripsinizzo e le piastrooooo....
non capisco più niente ho scongelato vials dal -80 e dall'azoto liquido...
si piastrano e poi si comportano anche loro così...
non so cosa possa essere... nn mi è mai capitata una cosa simile neanche con altri tipi cellulari...
Spero che qualkuno possa aiutarmi grazie!

miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 16:38:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao

vedi palle blu????
sono piccole e stanno tra le cellule?

mi sa che hai beccato un micoplasma...
qualcuno nel tuo lab fa i test per micoplismi?
se si....
fai analizzare il tuo medio cellulare

di solito il micoplasma non arriva a uccidere le cellule
ma rallenta la loro replicazione e le rende soggette a morte



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zampetta82
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 16:46:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zampetta82 Invia a zampetta82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
no nn facciamo test per micoplasma...
però anche io avevo pensato ad una cosa come questa ma il problema è...
come si trasmette da cellula a cellula??
io filtro tutto e quando le cellule muoiono le butto....
può essere che venga trasmesso da altri tipi cellulari coltivati nello stesso incubatore???
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miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 17:14:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io me lo sono beccato solo una volta
e si... purtoppo se altre cellule sono contaminate
te lo prendi nell'incubatore!!!

segue le regole delle altre contaminazioni batteriche

ma dovresti fare il test... esistono dei kit
nn sai di nessuno che potrebbe farlo???

perche' se sei sicuro... poi bastano 2 settimane di trattamento
e risolvi il problema

certo dovete pulire l'incubatore

ma se questo non e' il problema....
evita di rivoluzionare con le pulizie di pasqua la camera di cultivo
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zampetta82
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 18:09:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zampetta82 Invia a zampetta82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se fosse micoplasma come potrei intervenire??
Potrei usare la kanamicina o la neomicina??
Cmq il dubbio è atroce aiutatemi...
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miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 18:41:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao...

nn sono piu in lab...
domani ti mando il protocollo
ma l'antibiotico che devi usare nn e' nessuno dei due che hai detto
eh eh
sono batteri senza parete cellulare

ma ti ripeto il trattamento e' facilissimo
ma nn mi ricordo il nome dell'antibiotico
non e' comune

ripeto... domani ti invio tutto
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zampetta82
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 18:45:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zampetta82 Invia a zampetta82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille!!
Speriamo bene....
A domani....
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bububebè
Utente Junior

shampoo

Prov.: Na
Città: Napoli


255 Messaggi

Inserito il - 14 aprile 2009 : 20:05:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bububebè Invia a bububebè un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
zampetta 82... volevo dirti che è molto probabile che sia micoplasma (sto proprio studiando la contaminazione da micoplasma in biochimica clinica/biologia molecolare clinica), e posso dirti che, il fatto che filtri le cellule.... non vuol dire niente! Anche i filtri più selettivi (45 micron)sono letteralmente inutili... i micoplasmi sono più piccoli dei batteri(0.3-0.8 micron), sono tutti commensali, parassiti o patogeni,e sopratutto sono insensibili al trattamento pen/strep....
Per testare se la tua coltura è contaminata da micoplasma devi allestire una coltura microbiologica su agar (se il tuo labo prevede questo metodo)... diaciamo che è il metodo più usato ed estremamente sensibile in quanto in ogni coltura ottieni 1CFU.. inoltre devi servirti di 2 braccia : uno in anaerobiosi, l'altro in aerobiosi...
aspetta miky76 che ti invii il protocollo, nel caso io cerco di darti qualche elemento in più che può esserti utile! infatti,ho anch'io un protocollo a riguardo datomi dalla prof.. posso inviartelo, ma premetto che nella pratica non ho molta idea di come si proceda ...semmai io posso tentare di darti le istruzioni teoriche, confidando nella tua (sicura) maggiore esperienza pratica!...
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 08:02:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il test per il micoplasma adesso si fa anche con una rapida pcr... nei kit c'e' tutto il necessario (e.g. primers, controllo +...)

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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 09:39:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In coltura il test più usato è la PCR, che è più sensibile,
mentre quando la situazione è drammatica si arriva a vedere
i nuclei dei micoplasmi su vetrino anche con un semplice test DAPI.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 09:41:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per la "terapia" (spesso disperata...) delle
cellule di solito si usano degli antibiotici
specifici della famiglia delle cicline

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 10:10:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao

si di solito si fa una PCR
ma bisogna avere il kit

quindi se non hai il kit forse fare quello che dice bububebè non e' una cattiva idea


per il trattamento

noi usiamo un prodotto chiamato
Plasmocin 50mg della Nucliber
refernza ANT-MPT

e metti 1ul ogni ML di meduim per 2 settimane
naturalmente cambia il medium appena possibile e rinnova il plasmocin

poi dopo 2 settimane si dovrebbe rifare il test per essere sicuri che le cellule son pulite

e se vuoi... mantieni le tue cellule in plasmocin
ma 1ul ogni 5ML medium

in bocca al lupo

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zampetta82
Nuovo Arrivato



6 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 10:14:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di zampetta82 Invia a zampetta82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille per i consigli...
Cmq non so che pensare..intanto oggi proverò il test col DAPI e vediamo che succede anche se una collega che ha un problema con i micoplasma mi ha detto che le sue cellule (forse perchè tumorali) non muoiono e ne sembrano essere rallentate nella crescita...
Piuttosto sembrano subire delle alterazioni morfologiche e cromosomiche che inficiano i vari esperimenti...e inoltre sembrano essere anche molto diffuse...
inizio a pensare che se questa infezione esiste davvero possa essere derivata da cellule di coltura primaria presenti nel mio incubatore...perchè le mie sono tutte comprate e certificate!
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miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 15 aprile 2009 : 10:24:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok fai il test

ma le mie cellule comprovate con micoplasma da PCR
me le avevano spedite contaminate!!!

l'unico effetto che notavo era un rallentamento nella crescita
e ogni volta che provavo a usarle per una trasfezione
MORIVANO

dopo il trattamento... come nuove!!!
eh eh

ma forse ogni cellula reagisce in modo diverso
le mie erano PC12 e non sono tumorali

in bocca al lupo
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