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 rtPCR e topi vivi.
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data
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airplane_canvas
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89 Messaggi

Inserito il - 16 marzo 2006 : 20:19:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di data  Invia a data un messaggio ICQ  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di data Invia a data un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciau tutti, rieccomi che vi assillo!
Avrei bisogno di un suggerimento...ho un fenotipo variabile da topo a topo (sono dei ko) e vorrei correlarlo (vedi: età della morte, peso, prestazioni motorie, ecc) con i livelli di espressione di due proteine.
Posto che per il western blot che mi serve devo uccidere il topo come tecnica mi è assolutamente inutile (mi serve il cervelletto a 4 giorni...dovrei provare forse con la milza più avanti, ma splenectomizzare un topo e sperare che resti vivo mi sembra arduo)...pensavo allora ad estrarre l'RNA e fare una rt-PCR, dopo aver indagato se i livelli di RNA correlano con quelli della proteina di interesse. L'espressione dovrei riuscire anche a vederla nei precursori dei cheratinociti proliferanti...secondo voi se taglio la coda ai topi a 4 giorni e provo a estrarre RNA da lì posso ottenere qualcosa risultato?
Ho dato uno sguardo rapido in letteratura senza trovare niente di preciso preciso...grazie mille!

http://www.medito.eu.org/vodka/odierno

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 16 marzo 2006 : 21:22:19  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh, io faccio genotyping da coda di topo, estraendo il DNA genomico, e non ci sono problemi (anche se lo faccio da topi già svezzati, quindi un po' più grandicelli).

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data
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89 Messaggi

Inserito il - 16 marzo 2006 : 21:55:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di data  Invia a data un messaggio ICQ  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di data Invia a data un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
I genotipi li faccio anche io (appena le dita sono separabili tra loro!) - solo che mi han detto che l'RNA è un bel po' più delicato da estrarre e in lab da me lo fanno solo da organi interi. Grazie cmq, siete sempre ultrarapidi e pieni di suggerimenti-idee.

http://www.medito.eu.org/vodka/odierno
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