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ser
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Inserito il - 21 aprile 2009 : 17:28:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Carissimi amici

qualche mese fa ho vinto il dottorato e ho da poco cominciato a lavorare in lab.Mi occuperò di micropropagazione di piante, che non ho mai fatto.E cominciano i problemi!Spero che qualcuno mi possa dare una mano!Ad esempio dovrei aggiungere 2 mg/l di un ormone in un mezzo caldo e liquido (prima che consolidi e di piastrarlo).Devo fare una stock solution in mg/l ?Come mi devo regolare visto che mi sembra impossibile metterlo così tal quale!
Grazie

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 21 aprile 2009 : 17:40:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Devo fare una stock solution in mg/l ?


Non capisco il senso di questa domanda...

Ad ogni modo se la concentrazione finale deve essere di 2 mg/ml, potresti fare uno stock 100x (o 1000x) cioè 200mg/ml (o 2g/ml) e poi usarlo diluito 1:100 (o 1:1000).

Gli unici fattori limitanti sono:
1) la quantità di ormone che hai
2) la sua solubilità


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ser
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Inserito il - 21 aprile 2009 : 17:54:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Chick...e grazie per la risposta.
spero di essere più chiaro.In un litro di mezzo dovrei aggiungere 2 mg di ormone ...pensavo di fare una soluzione da cui poi prendere un volume in microlitri o ml da aggiungere al litro di mezzo per avere una concentrazione finale di 2mg/l.
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 21 aprile 2009 : 18:05:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa, avevo letto 2 mg/ml, comunque l'idea è la stessa.

Devi avere 2 mg in un litro, fai una soluzione a concentrazione 1000 volte più alta (questa viene indicata come 1000x) cioè 2 mg in un ml che usi come stock (ovviamente ne farai un po' più di un ml, così ti dura per un po' ad es. potresti farne 50 ml).

A questo punto quando devi fare l'esperimento metti 1 ml di questa soluzione stock in 1 l di medium (cioè fai una diluizione 1:1000).
Per comodità puoi anche farti delle aliquote da 1ml dello stock così poi ti basta prendere 1 aliquota e diluirla completamente nella tua soluzione.

---

L'altro fattore da considerare è la stabilità dell'ormone. Molti composti possono essere tenuti in soluzione a -20°C senza problemi per lungo tempo, ma altri no.

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ser
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Inserito il - 21 aprile 2009 : 18:16:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sempre grazie ma correggimi se sbaglio.Ho fatto dei calcoli:
devo preparare 100ml di soluzione di un ormone in modo tale che una aliquota di questa (1 ml) sia di 2mg/l da aggiungere al medium caldo prima che si freddi e consolidi.Cioè devo sciogliere 200 mg di polvere ormonale in un vol di etanolo e portare a volume con acqua sterile e deionizzata?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 21 aprile 2009 : 18:29:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
devo preparare 100ml di soluzione di un ormone in modo tale che una aliquota di questa (1 ml) sia di 2mg/l da aggiungere al medium caldo prima che si freddi e consolidi


Penso tu abbia capito, ma giusto per essere chiaro riscrivo:

Tu prepari 100 ml di soluzione stock 2mg/ml, se vuoi la aliquoti, ma le singole aliquote saranno sempre 2mg/ml. Aliquotare una soluzione NON ne cambia la concentrazione.

Nel momento in cui tu metti quel ml di stock (1000 volte più concentrato di quanto serva a te) in 1 litro di acqua/terreno di coltura/quelloCheVuoiTu, lo diluisci di 1000 volte e quindi LA SOLUZIONE FINALE diventerà 2 mg/l

===

Per quanto riguarda l'etanolo non saprei, dipende dall'ormone. Controlla innanzitutto se è solubile in acqua e a che concentrazione. Se non è solubile in acqua lo dovrai prima sciogliere in etanolo e poi metterlo in soluzione acquosa. Lo stock lo puoi fare in etanolo anche se forse in quel caso conviene fare uno stock 10000x in modo che nel terreno finale tu non abbia molto etanolo che può essere tossico.

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ser
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Inserito il - 22 aprile 2009 : 20:15:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Spero di aver capito ma riassumo con degli esempi numerici:
Preparo una soluzione ormonale o vitaminica concentrata 1mg/ml, cioè in 100ml di acqua sciolgo 100mg di ormone o vitamina. 1 ml di tale sol. e così qualunque vol.della stessa avrà ovviamente la stessa conc. cioè 1mg/ml.Se 1 ml lo aggiungo a 1000ml di mezzo ho diluito 1000 volte e avrò alla fine una conc. di 0.001 (mg/ml ?).La formula sarà V1 x C1 = V2 x C2 cioè 1 ml x 1 mg/ml = 1000 ml x X
Per lo stesso motivo 300 microlitri della sol. in 1000 ml diventeranno 0.3 mg/ml?
Ho capito bene?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 22 aprile 2009 : 22:03:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Preparo una soluzione ormonale o vitaminica concentrata 1mg/ml, cioè in 100ml di acqua sciolgo 100mg di ormone o vitamina. 1 ml di tale sol. e così qualunque vol.della stessa avrà ovviamente la stessa conc. cioè 1mg/ml.Se 1 ml lo aggiungo a 1000ml di mezzo ho diluito 1000 volte e avrò alla fine una conc. di 0.001 (mg/ml ?).


Esatto. 0.001 mg/ml = 1 mg/l

Citazione:
La formula sarà V1 x C1 = V2 x C2 cioè 1 ml x 1 mg/ml = 1000 ml x X

Sì, puoi usare quella formula

Citazione:
Per lo stesso motivo 300 microlitri della sol. in 1000 ml diventeranno 0.3 mg/ml?

0.3 mg/l

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ser
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Inserito il - 22 aprile 2009 : 22:26:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

Citazione:
Preparo una soluzione ormonale o vitaminica concentrata 1mg/ml, cioè in 100ml di acqua sciolgo 100mg di ormone o vitamina. 1 ml di tale sol. e così qualunque vol.della stessa avrà ovviamente la stessa conc. cioè 1mg/ml.Se 1 ml lo aggiungo a 1000ml di mezzo ho diluito 1000 volte e avrò alla fine una conc. di 0.001 (mg/ml ?).


Esatto. 0.001 mg/ml = 1 mg/l

Citazione:
La formula sarà V1 x C1 = V2 x C2 cioè 1 ml x 1 mg/ml = 1000 ml x X

Sì, puoi usare quella formula

Citazione:
Per lo stesso motivo 300 microlitri della sol. in 1000 ml diventeranno 0.3 mg/ml?

0.3 mg/l



Grazie ...molto più chiaro
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ser
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Inserito il - 24 aprile 2009 : 10:10:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando

Sto studiando su un articolo e mi sono imbattuto nelle seguenti unità di misura …spero di averle interpretate bene.Che ne dite?

2 cm³/dm³ (V/V) ……..2ml/l?

100cm³……..100 ml ?

Grazie
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


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Inserito il - 24 aprile 2009 : 11:32:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì esatto. Anche se non credo di aver mai visto qualcuno usare i dm!

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ser
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Inserito il - 04 maggio 2009 : 18:08:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Approfitto ancora della vostra disponibilità
Ho un litro di mezzo in cui la conc. attuale di glicina è 0.1mg/L.Da considerare che il mezzo lo preparo a partire da un prodotto commerciale.Il problema è che devo fare una modifica nella conc. della glicina portandola ad 1mg/L cioè ne devo aggiungere 0.90mg/L.Pensavo di preparare per l'occasione una soluzione conc. di sola glicina,ovvero pesare ad esempio 50mg di glicina e portare a volume a 50 ml per avere una conc. di 1 mg/ml.Dopo di che ne prendo una aliquota cioè 900 microlitri ( ?) e in questo modo penso dovrei raggiungere lo scopo di portare la conc finale di glicina in 1 litro di mezzo ad 1mg/L. E' corretto? Ho seri dubbi sul mio ragionamento però!!!!
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ser
Nuovo Arrivato



97 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2009 : 00:04:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Cari amici,
ho bisogno del vostro supercontrollo su questi calcoli:
Ho sempre il mio solito litro di mezzo da preparare a cui devo aggiungere i seguenti ormoni (separatamente o insieme non importa):
BA : 4.4 microM con PM di 225.3
IBA : 0.49 microM con PM di 203.2
NAA : 0.054 microM con PM di 186.2

Applicando la formula della molarità ho ottenuto i seguenti valori per comodità in mg/L:

BA :0.99 mg/L
IBA : 0.01 mg/L
NAA : 0.01 mg/L


Il ragionamento è :

ho trasformato la microM in Molarità moltiplicando per 10 alla meno 6.
ho applicato la formula della molarità sapendo che ad esempio 225.3 g di BA corrispondono ad 1 mole quindi 225.3 g/L corrispondono ad 1 mole /L cioè 4.4 x 10 alla - 6 M corrispondono a 0.99 mg/L. Spero che il mio ragionamento sia giusto!!!
Ma non è finita.
Infatti devo preparare delle opportune soluzioni concentrate:

IBA : 0.01 mg devono essere contenute in 1 ml di sol. conc.
quindi posso pesare 0.5 mg e portare a 50 ml di volume
Idem per NAA
mentre per BA ne preparo sempre 50 ml ma ne peso 49.5 mg.

Spero in una vostra conferma!!!!!!!
Grazie
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GFPina
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GFPina

Città: Milano


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Inserito il - 09 maggio 2009 : 00:33:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da ser

Ho un litro di mezzo in cui la conc. attuale di glicina è 0.1mg/L.Da considerare che il mezzo lo preparo a partire da un prodotto commerciale.Il problema è che devo fare una modifica nella conc. della glicina portandola ad 1mg/L cioè ne devo aggiungere 0.90mg/L.Pensavo di preparare per l'occasione una soluzione conc. di sola glicina,ovvero pesare ad esempio 50mg di glicina e portare a volume a 50 ml per avere una conc. di 1 mg/ml.Dopo di che ne prendo una aliquota cioè 900 microlitri ( ?) e in questo modo penso dovrei raggiungere lo scopo di portare la conc finale di glicina in 1 litro di mezzo ad 1mg/L. E' corretto? Ho seri dubbi sul mio ragionamento però!!!!

Diciamo che in linea teorica non è correttissimo, perchè il volume finale non sarà più 1 litro ma un po' di più (1,0009 L) quindi le concentrazioni sia della glicina sia degli altri reagenti non saranno esattamente uguali, ma in realtà 900ul su 1 L sono un volume trascurabile quindi va bene!
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


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Inserito il - 09 maggio 2009 : 00:58:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per la seconda domanda non mi tornano i conti!
Citazione:
Messaggio inserito da ser

IBA : 4.4 microM con PM di 225.3
IBA : 0.49 microM con PM di 203.2
NAA : 0.054 microM con PM di 186.2

Applicando la formula della molarità ho ottenuto i seguenti valori per comodità in mg/L:

BA :0.99 mg/L
IBA : 0.01 mg/L
NAA : 0.01 mg/L

Il ragionamento va bene però:
BA : 4.4 x 10^-6 mol/L x 225.3 g/L = 0.99 mg/L (e questo va bene)
IBA : 0.49 x 10^-6 mol/L x 203.2 g/L = 0.0996 mg/L che puoi approssimare a 0.1 mg/L (non 0.01 mg/L!!!)
NAA : 0.054 x 10^-6 mol/L x 186.2 g/L = 0.01 mg/L (e questo va bene)

Citazione:
IBA : 0.01 mg devono essere contenute in 1 ml di sol. conc.
quindi posso pesare 0.5 mg e portare a 50 ml di volume
Idem per NAA
mentre per BA ne preparo sempre 50 ml ma ne peso 49.5 mg.

Hai scelto proprio quello di cui avevi sbagliato i conti, a parte questo il ragionamento è giusto!
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ser
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Inserito il - 09 maggio 2009 : 09:17:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ser Invia a ser un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie 1000 GFPina!!!

Citazione:
Messaggio inserito da GFPina

Citazione:
Messaggio inserito da ser

Ho un litro di mezzo in cui la conc. attuale di glicina è 0.1mg/L.Da considerare che il mezzo lo preparo a partire da un prodotto commerciale.Il problema è che devo fare una modifica nella conc. della glicina portandola ad 1mg/L cioè ne devo aggiungere 0.90mg/L.Pensavo di preparare per l'occasione una soluzione conc. di sola glicina,ovvero pesare ad esempio 50mg di glicina e portare a volume a 50 ml per avere una conc. di 1 mg/ml.Dopo di che ne prendo una aliquota cioè 900 microlitri ( ?) e in questo modo penso dovrei raggiungere lo scopo di portare la conc finale di glicina in 1 litro di mezzo ad 1mg/L. E' corretto? Ho seri dubbi sul mio ragionamento però!!!!

Diciamo che in linea teorica non è correttissimo, perchè il volume finale non sarà più 1 litro ma un po' di più (1,0009 L) quindi le concentrazioni sia della glicina sia degli altri reagenti non saranno esattamente uguali, ma in realtà 900ul su 1 L sono un volume trascurabile quindi va bene!



Quindi se volessi far un calcolo corretto come dovrei agire?


E poi
IBA : 0.49 x 10^-6 mol/L x 203.2 g/L = 0.0996 mg/L che puoi approssimare a 0.1 mg/L (non 0.01 mg/L!!!)

mamma mia che errore ho fatto!!!!

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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


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Inserito il - 09 maggio 2009 : 16:30:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da ser
Quindi se volessi far un calcolo corretto come dovrei agire?

Beh la cosa sarebbe abbastanza complicata, innanzitutto dovresti sapere anche la concentrazione degli altri reagenti e aggiungere anche quelli se aumenti il volume, il calcolo è un po' complicato perchè devi tener conto dell'aumento di volume.
Ma questo in realtà non si fa, si agisce come hai fatto tu cercando di tenere il volume da aggiungere al minimo possibile in modo che sia trascurabile.
900ul su 1 L sono trascurabili, quando misuri 1L di soluzione con un cilindro non sarà mai esattamente un litro ma ci può essere una variazione + o - di qualche ml, quindi l'aggiunta di 900ul non ti fa variare la soluzione.
Devi solo stare attento quando fai questi conti che il volume che aggiungi sia trascurabile rispetto al volume totale.

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