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 precipitazione con solfato d'ammonio
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tiziana1979
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10 Messaggi

Inserito il - 22 aprile 2009 : 18:41:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tiziana1979 Invia a tiziana1979 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, avrei una domanda da porvi...
L'analisi proteica viene influenzata se il campione è stato fatto precipitare con solfato d'ammonio ma non è stato dializzato (e quindi contiene ancora del sale)? Cioè è corretto che i pellet (contenenti le proteine) derivanti dalla precipitazione con tale sale vengano direttamente letti per l'analisi proteica? O è più corretto prima dializzarli?
Io sostengo la seconda teoria ma a lovoro qualcuno sostiene che non sia così.
Mi aiutate?
Inoltre secondo voi la precipitazione con alcool a freddo si può prestare meglio per allontanare dei lipidi dal mio campione contenente le proteine rispetto alla precipitazione prima accennata? Se si qualcuno conosce tale protocollo?
Grazie mille.

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1701 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 00:25:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
L'analisi proteica viene influenzata se il campione è stato fatto precipitare con solfato d'ammonio ma non è stato dializzato (e quindi contiene ancora del sale)? Cioè è corretto che i pellet (contenenti le proteine) derivanti dalla precipitazione con tale sale vengano direttamente letti per l'analisi proteica? O è più corretto prima dializzarli?
Io sostengo la seconda teoria ma a lovoro qualcuno sostiene che non sia così.

Per analisi proteica, cosa intendi? Una lettura dell'assorbanza? Un dosaggio proteico?
Anch'io ero dell'idea di dializzare(e trovo ancora sia corretto dializzare)...però quando l'ho fatto non ho trovato nessuna differenza fra il pool dializzato e quello non dializzato (in termini di quantizzazione proteica).

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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tiziana1979
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 12:53:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tiziana1979 Invia a tiziana1979 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
intendo la lettura dell'assorbanza.
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biologomolecolare84
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DNA

Prov.: Rm
Città: Roma


69 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 13:42:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biologomolecolare84 Invia a biologomolecolare84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi, vorrei chiedervi come si può fare una soluzione al 100% di Ammonio Solfato.

Ho trovato che bisogna sciogliere 767 g in 1L di dH2O (vorrei prepararne 50 ml e ho aggiunto 38,35 g). Il problema è che non riesco a scioglierli...nè con stirrer, nè col caldo e nemmeno aggiungendo il sale poco alla volta...
è possibile che si debba arrivare ad un pH particolare?

Scusate l'ignoranza, ma è il mio primo approccio alla proteomica!
Grazie a tutti.
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tiziana1979
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 13:52:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tiziana1979 Invia a tiziana1979 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
perdonami... ma a che molarità ti serve la soluzione?
Se sai a che molarità la vuoi ottenere, basta che usi il peso e ottieni i grammi che ti servono rispetto a 50 ml totali.
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tiziana1979
Nuovo Arrivato



10 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 14:08:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tiziana1979 Invia a tiziana1979 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
il solfato di ammonio (NH4)2SO4 ha una massa di 132.14 g/mol
per una sol 1M in 1l finale di H2O avrai 132.14 g da pesare
per una sol 1M in 50 ml finali avrai 6.6 g da pesare
ci sei?
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 15:06:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
@ tiziana, deve preparare una soluzione al 100%, la molarità in questo caso è 4,1M a 25ºC

@biologomolecolare: essendo una soluzione satura sicuramente fa fatica, riguardo al pH non ti saprei dire, ma mi pare di no, guardo se trovo altre informazioni. Poi riprova re facendola poco alla volta e vedendo a che fino a che punto riesci a scioglerla.
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biologomolecolare84
Nuovo Arrivato

DNA

Prov.: Rm
Città: Roma


69 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2011 : 20:22:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biologomolecolare84 Invia a biologomolecolare84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho provato tutto un pomeriggio...anche aggiungendo un po' alla volta, in agitazione e lo stirrer a 100°C...ma niente...mi sa che dovrò accontentarmi della soluzione al 90%...Grazie a tutti :-)
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8380 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2011 : 00:43:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da biologomolecolare84

Ho provato tutto un pomeriggio...anche aggiungendo un po' alla volta, in agitazione e lo stirrer a 100°C...ma niente...mi sa che dovrò accontentarmi della soluzione al 90%...Grazie a tutti :-)


Mmmm...
un pomeriggio non è niente, alcune soluzioni richiedono anche giorni e... tanta pazienza!
Non scaldare MAI le soluzioni a 100ºC, non vanno fatte bollire!
La concentrazione di solfato di ammonio che hai utilizzato è per fare una soluzione satura a 25ºC, quindi un po' sopra questa temperatura dovrebbe sciogliersi tutto, quindi scalda la soluzione mentre agiti ma senza esagerare, io non supererei i 50ºC che già è molto di più di quello che ti dovrebbe servire.
Preparare una soluzione satura non è molto facile in genere, appunto perchè essendo "satura" sei al limite della solubilità. In teoria preprandola a temperatura superiore si dovrebbe sciogliere completamente e poi tenendola a temperatura ambiente dovresti vedere la formazione di alcuni cristalli.
Il problema del dissolvimento non completo potrebbe anche essere dovuto ai reagenti che hai utilizzato, l'acqua era abbastanza pura? La cosa migliore sarebbe utilizzare acqua HPLC grade e sali ACS grade.
Se i reagenti non sono abbastanza puri, può essere che tu non riesca ad ottenere una soluzione 100%.

Ti consiglio di riprovare aggiungendo il sale poco alla volta, aggiungi altro sale quando il precedente è sciolto e lascia in costante agitazione scaldando la soluzione (ma non troppo!), se non si è sciolto lascialo anche tutta la notte. Segnati man mano il sale che hai aggiunto (o pesa quello rimasto) in modo comunque da sapere che soluzione hai ottenuto alla fine nel caso non si sia sciolto tutto.
Ricorda che la soluzione preparata e filtrata quando ancora calda, va poi lasciata riposare a T ambiente almeno un giorno e dovresti veder formare dei cristalli.
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biologomolecolare84
Nuovo Arrivato

DNA

Prov.: Rm
Città: Roma


69 Messaggi

Inserito il - 29 dicembre 2011 : 20:08:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biologomolecolare84 Invia a biologomolecolare84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie GFPina...seguirò i preziosi consigli e ti farò sapere.

PS:Buon anno a tutti!
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luckybio
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2013 : 09:32:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di luckybio Invia a luckybio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, vorrei sapere se esiste un volume minimo su cui eseguire la precipitazione. Oppure no?
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