Plasmidi e dna ricombinante

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Discussione

Evil
Nuovo Arrivato

67 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2009 : 19:36:39

Oggi � sorto un problema in laboratorio, piu che altro una riflessione..

Se io integro un gene in un plasmide che ha AMPr e LacZ (in LacZ c� il polilinker), metto questo plasmide in una coltura di batteri, quindi effettuo uno screening bianco/blu... quelli bianchi saranno i batteri che hanno preso il plasmide con il gene integrato.. tra questi batteri per� avr� sia quelli che hanno il plasmide con il gene di mio interesse in antisenso, sia quelli che lo hanno in senso (perch� non si � presa alcuna precauzione, quindi ho una prob del 50 e 50 che sia senso o antisenso)....
Come faccio a discriminare quali batteri hanno il gene in antisenso e quali no? devo saperlo poich� il trascritto � trascrivibile sia 5' -> 3' sia 3'->5' (grazie a T7 e SP6 fagiche) e a me serve un RNA sonda...

Grazie a chiunque voglia provare :)

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2009 : 10:43:46

potevi inserire il frammento usando due siti di restrizione diversi al 5' e 3', in modo da avere la giusta direzionalit�. se non l'hai fatto secondo me la cosa pi� sicura da fare � sequenziare qualche miniprep.

RM
Nuovo Arrivato

115 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2009 : 12:56:50

Puoi fare una colony con primers specifici per il vettore/inserto (s/as) o vettore/inserto (as/s)in modo da discriminare i due possibili orientamenti
ciao