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molecola84
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88 Messaggi |
 Inserito il - 24 aprile 2009 : 11:08:09
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salve a tutti sto usando delle multiwell da 96 per piastrare cellule in adesione (nello specifico c4)..dopo vari tentativi sono arrivata a piastrarne 15000. Quando le metto in terreno rosso tutto bene, quando poi le piastro in bianco muoiono..qualcuno sa dirmi qualcosa a proposito? esiste qualche trucco ..vi prego risponedete:-)
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chick80
Moderatore
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11491 Messaggi |
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 24 aprile 2009 : 11:25:13
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
dovresti definirci "terreno rosso" e "terreno bianco"...
Ce ne sono decine...
il terreno è dmem rosso, il bianco inoltre è al 2% CSS.. come da protocollo; ma non è proprio questo il problema, il fatto + che altro è che sia se cambio il terreno aspirando con la pipetta delicatamente, sia se capovolgo la piastra..le cellule si staccano ed ho notato che tendono a morire quelle nelle file + esterne della piastra..mistero! tu le usi queste piastre? E NON HAI PROBLEMI? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 24 aprile 2009 : 14:16:25
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Avevo problemi simili con delle piastre più piccole (da 32 o qualcosa del genere).
Il problema è che il fondo delle file più esterne a volte (dipende dalla marca della piastra) non è orizzontale, e le cellule tendono a staccarsi. Io risolsi semplicemente cambiando marca di piastre.
Potresti anche provare a mettere del coating sulle piastre (es. collagene, polilisina, poliornitina etc...) |
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 26 aprile 2009 : 17:55:58
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| a me le piastre sono da 96 pozzetti, quindi sono ancora + piccole..mah credo ch proverò a seguire qualche tuo suggerimento grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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albertino
Nuovo Arrivato
Prov.: pa
Città: palermo
30 Messaggi |
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 28 aprile 2009 : 11:15:11
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Citazione:
Messaggio inserito da albertino
interessante.....
interessante? ovvero?:-9 |
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titty-80
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 28 aprile 2009 : 21:50:53
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immagino che intendi mezzo con (rosso) e senza (bianco) phenol red. anch'io facevo saggi su piastre da 96 con RPMI con e senza colorante, ma non ho avuto mai problemi.
assicurati che siano effettivamente lo stesso terreno, quindi stessa composizione, inoltre (non so se lo fai anche tu) piastrale con il mezzo completo, cioè con phenol red, e usa quello privo di colorante solo nel momento del saggio, magari facendo un bel lavaggio prima in modo da togliere ogni residuo di colorante |
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titty-80
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 28 aprile 2009 : 21:52:07
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immagino che intendi mezzo con (rosso) e senza (bianco) phenol red. anch'io facevo saggi su piastre da 96 con RPMI con e senza colorante, ma non ho avuto mai problemi.
assicurati che siano effettivamente lo stesso terreno, quindi stessa composizione, inoltre (non so se lo fai anche tu) piastrale con il mezzo completo, cioè con phenol red, e usa quello privo di colorante solo nel momento del saggio, magari facendo un bel lavaggio prima in modo da togliere ogni residuo di colorante |
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titty-80
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 28 aprile 2009 : 21:58:30
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ho risposto senza leggere tutti i post... scusate.
strana sta cosa che si staccano...
comunque i pozzetti esterni sono sempre i più sfigati. con le 96 non ho avuto mai problemi ma usavo cellule ignoranti, mentre ultimamente trovo lo stesso problema dei pozzetti esterni nelle piastre da 24...
mistero, anche perchè fino a qualche tempo fa non ci facevano...
anch'io penso sia un problema di plasticheria.
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 03 maggio 2009 : 13:20:41
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| no in realtà, ora che nn ho + usato i pozzetti esterni la situazione visibilmente sembra andare meglio ma quando effettuo il saggio colorimetrico o quello con BrdU in realtà anche ne pozzetti in cui do lo stimolo non ho un'aumneto rilevante.. secondo me è proprio il tipo cellulare.. si cmq per titty..intendevo phenol red..e ho piastrato sia prima in rosso, poi lavaggio e messe in bianco..poi stimoli e inibitori, sia direttamente in bianco per evitare che ne perdessi troppe nei lavaggi e cambi d terreno. ho provato anche a nn aspirare il terreno, ma direttamene a capovolgerela piastra.mah non soc he dire!tu che cellule usavi? |
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titty-80
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2009 : 08:41:55
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io usavo fibroblasti umani...
l'unica cosa che mi può venire in mente: piastra solo i pozzetti interni come stai già facendo, ma in quelli esterni mettici comunque qualcosa (in genere PBS o acqua sterili, insomma qualcosa a spendere poco ma che non ti crei contaminazioni!!!).
e controlla l'incubatore, può essere anche un'erogazione non più costante di CO2... |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2009 : 08:55:50
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Citazione:
in realtà anche ne pozzetti in cui do lo stimolo non ho un'aumneto rilevante.
Potrebbe essere un problema nel tipo di stimolo che dai? |
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2009 : 12:41:58
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Citazione:
in realtà anche ne pozzetti in cui do lo stimolo non ho un'aumneto rilevante.
Potrebbe essere un problema nel tipo di stimolo che dai?
infatti ora ho cambiato nn stimolo + con EGf , ma con Fbs..oggi vedrò..grazie ragazzi..cmq la cosa certa è che i pozzetti esterni nn vanno bene (per titty) |
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molecola84
Nuovo Arrivato
Prov.: ol
Città: ugan
88 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2009 : 12:44:52
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Citazione:
in realtà anche ne pozzetti in cui do lo stimolo non ho un'aumneto rilevante.
Potrebbe essere un problema nel tipo di stimolo che dai?
per quanto riguarda la co2 è tutto ok..non è un problema di incubatore sicuramente. Da oggi parto anche con una fase s normale e si vedrà. grazie ragazzi.. |
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