Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Tecniche
 cloning
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'Ŕ:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto Ŕ utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

madferit84
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2009 : 00:42:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di madferit84 Invia a madferit84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao ragazzi allora mi e` venuto un dubbio e volevo discuterne con voi.

dunque sono impegnato nel clonaggio e sequenziamento del gene mc1r coinvolto nelle pathways che giocano un ruolo fondamentale nell`insorgere del Melanoma. vi riassumo i passi fatti:

1) amplificazione by PCR della coding region con primer disegnati x poter clonare il gene usando pENTR Directional TOPO cloning by invitrogen tramite DREAMTAQ GREEN POLYMERASE BY FERMENTAS ( non e` proof reading in quanto con la pfx abbiamo avuto groooosi problemi)

2)subcloning in t easy vector 2 by Promega

3) ecori digestion

4) purificazione gel dell` mc1r generato dalla digestione e topo CLONING

....e la faccenda continua....usando la tecnologia GATEWAy....

ora x clonare in TOPO un requisito fondamentale e` la presenza di prodotto PCR BLUNT ended! la dreamtaq green none` proof reading quindi genera sticky ends . x questo motivo decidemmo di procedere prima al sub-cloning in teasy...tagliare il gene di interesse dal plasmide con ECORI e clonarlo in topo.

lamia domanda e`: se ecori e` un endonucleasi...genera ancora una volta sticky ends....?? siamo riusciti aclonare il gene il topo..quindi presumo di avere pcr product blunt end!?

che ne pensate?

2)
  Discussione  

Quanto Ŕ utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina