Uso di CRE per una delezione tessuto-specifica

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Discussione

Evil
Nuovo Arrivato

67 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2009 : 18:07:27

come si potrebbe usare CRE per fare una delezione di un gene per esempio quello della connexina 3 in un tessuto specifico.. come specificità sò che il gene rx1 è espresso solo nel tessuto dove voglio fare la delezione..

Grazie

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 26 aprile 2009 : 18:23:07

Innanzitutto dovresti procurarti degli animali "connessina 3 - floxed" ovvero, animali in cui è stato fatto un KO del gene della connessina ed un knock-in di un costrutto:

loxP-connessina 3-loxP

Gli animali floxed solitamente sono uguali ai wild type ed esprimono la connessina (o il gene "floxato") normalmente.
A questo punto incroci questi animali con una linea di rx1-Cre che esprimono Cre sotto il controllo del promotore di rx1 (o di quello che vuoi tu). Anche questi animali solitamente sono uguali ai wild type.

Nella progenie la connessina 3 verrà excisa da Cre, ma solo nel tessuto specifico, in quanto Cre non è presente da altre parti.

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Evil
Nuovo Arrivato

67 Messaggi

Inserito il - 27 aprile 2009 : 08:23:53

chiarissimo, molte grazie!

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 27 aprile 2009 : 13:26:52

un'altra cosa che si potrebbe fare, è allestire una coltura primaria dal tessuta d'interesse del topo flox-connexin-flox e poi infettarlo con un virus contenente il costrutto cre.