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blasco23
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 04 maggio 2009 : 12:03:57
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salve a tutti ho a breve l'esame di ingegneria genetica e mi interessava sapere il funzionamento di pbluescript, come viene regolata l' espressione del gene di interesse in relazione anche al funzionamento di t3 e t7 insomma tutto cio che riguarda questo vettore grazie mille
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 04 maggio 2009 : 23:20:30
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Ciao
pBluescript è un fagemide utilizzabile sia per il
clonaggio che per l'espressione di proteine in batteri.
E' possibile utilizzarlo in vitro per esprimere RNA a
filamento + o - utilizzando la RNA polimerasi del fago
T3 oppure del fago T7 (i due promotori corrispondenti
sono girati l'uno in un senso, l'altro in senso opposto)
ma non direi che l'espressione del gene d'interesse è
regolata da questi.
Il sito di clonaggio multiplo è sotto il
controllo del promotore Lac, ed interrompe
il reporter LacZ, permettendo così di fare
screening di alfa-complementazione.
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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blasco23
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 05 maggio 2009 : 10:03:26
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Grazie della risposta . un' altra cosa che nn capisco è però se la polimerasi fagica si lega al promotore t3 o t7 l' origine di replicazione fagica a cosa serve??
La polimerasi t3 e t7 poi le devo inserire io nella cellula oppure ci sono geni per la polimerasi nel cromosoma della cellula batterica??
Ho letto che l' origine di replicazione f1 serve per sintetizzare filamenti a singola elica.A cosa mi può servire???
Grazie ancora |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 05 maggio 2009 : 15:33:48
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Ok non sono stato il massimo della chiarezza.
Allora, provo a ripeterti:
- I promotori T3 e T7 servono per la trascrizione in vitro
(un'operazione che NON si fa nella cellula, ma in provetta,
a partire da grandi quantità di DNA, aggiungendo NTPs ed enzima)
- L'Ori fagica e serve per il clonaggio fagico , procedura
che si avvale di fagi helper (e quindi di trans-complementazione
in cellule batteriche) per impacchettare il costrutto in particelle
virali di un fago filamentoso (di solito l'enterobacteria phage M13)
che contiene caratteristicamente DNA a singolo filamento, isolabile!
Se qualcosa nello specifico non ti è chiaro dimmi! |
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blasco23
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 05 maggio 2009 : 20:11:44
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ma se io utilizzo pbluescript per permettere l 'espressione di un gene in una cellula batterica, la mia polimerasi si attacca al promotore e permette poi grazie all interruzione del gene lac di vedere l 'insersione del frammeno oppure no. In questo caso l' ori f1 a cosa mi serve???
Grazie della cortesia e pazienza ma questo argomento mi è molto ostico |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 05 maggio 2009 : 20:22:44
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Mi pare che ti sfuggano un paio di concetti di base:
ancora prima che per esprimere proteine in un batterio,
a cosa serve un plasmide? e a cosa un fagemide?
oppure
Qual'è la differenza tra un vettore di clonaggio
e un vettore d'espressione?
La risposta che cerchi è fra le risposte a queste domande!
Prova a rispondere.
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pbluescript
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