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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 21 marzo 2006 : 15:01:51
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Chi di voi ha avuto a che fare con le colonnine della Sephadex PD-10 ? Io in particolare le uso per estrarre proteine da cellule (fibroblasti) e devo dire che i recuperi lasciano alquanto a desiderare visto che caricando un numero di cellule pari a 18 milioni ovvero sui 7mg/ml di proteine ne abbiamo recuperate 1.2mg/ml.
Per caso qualcuno di voi usa qualche altro tipo di colonnina per la cellule?
THANK'S
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 21 marzo 2006 : 21:30:01
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Quindi filtri semplicemente per dimensione? (suppongo pd-10 stia per 10kDa)
Io uso le Microcon della Millipore, non so se possano esserti utili, io le uso per tutt'altro, ma dovrebbero funzionare.
Guarda qui per caratteristiche e prezzi (io pago circa 30 euro per 10 colonnine, ma i prezzi saranno diversi in Italia)
PS: sephadex non e' la marca, e' il materiale della colonna! |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 22 marzo 2006 : 12:22:38
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Scusa per le imprecisioni( anche per il THANKS),effettivamente uso quelle colonnine che sono della Amersham, sono fornite nel kit della Beckman insieme alle colonne ed ai buffers per il PF2D con il quale dobbiamo separare le nostre proteine prima di mandarle alla massa.
Comunque dovremmo aver risolto il problema (nei prossimi giorni faremo le opportune prove)(ovvero mi risentirete) in quanto la specialist della Beckman ci ha detto che in quelle PD 10 non si è mai spinta a caricare più di 5mg totali, mentre io ne avevo caricato 17mg tot. Chi è colpa del suo mal pianga se stesso.
Comunque grazie per l'informazione per le Microcon, visto che conosco il rappresentante, cercherò di provarle.Tu le usi per le proteine cellulari? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 22 marzo 2006 : 13:02:24
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No, io uso le microcon per tutt'altro... :D
Le uso per filtrare un coniugato di estrogeno e BSA per eliminare l'estrogeno libero!
Comunque non vanno benissimo se devi separare proteine con peso simile, vanno bene se ad es hai un mix di proteine piccole e grandi, per separare i due gruppi perche' fanno da filtro (cioe filtrandoti tutto cio' che e' piu piccolo di x kDa).
Ciao |
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