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francy79
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Inserito il - 06 maggio 2009 : 11:02:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di francy79 Invia a francy79 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buon giorno, volevo sapere se qualcuno ha mai utilizzato il pJET per il clonaggio. Da un po' di tempo sto cercando di clonare dei frammenti a blunt end di DNA di diversa lunghezza. Una volta estratto il plasmide allestisco la PCR come indicato dal protocollo, ottengo un amplificato di lunghezza leggermente inferiore a quella attesa, mando a sequenziare, ma il risultato che ottengo è sempre una parte del vettore. La cosa strana è che i primer dovrebbero amplificare solo 121 bp del vettore, invece, dalle varie prove ho ottenuto frammenti anche di 900 bp che inserendoli in multalin coincidono per la maggior parte alla sequenza del plasmide.
Qualcuno mi può illuminare su quale può essere il motivo?
Grazie
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