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carlaorru
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37 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2009 : 18:47:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di carlaorru Invia a carlaorru un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Sto frequentando un laboratorio di PMA (procreazione medicalmente assistita)dove conto di preparare la tesi di laurea specialistica in biologia cell.molecolare. Avrei bisogno di sapere se qualcuno puo' fornirmi un protocollo di FISH su liquido seminale da consultare e valutare, perchŔ vorrei trattare i campioni con questa tecnica (che ho eseguito solo su campioni di sangue) ed effettuare una comparazione tra morfologia e altri parametri tra cui quello citogenetico.Vi ringrazio moltissimo, aspetto fiduciosa!

ukitel
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78 Messaggi

Inserito il - 16 maggio 2009 : 13:16:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ukitel Invia a ukitel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
La FISH su liquido seminale si pu˛ fare tranquillamente, ma Ŕ un po' difficile a causa dell'estrema condensazione del DNA nello spermatozoo, che rende impossibile l'accesso alla sonda, senza una buona denaturazione.
Da quello che ho letto posso consigliarti una denaturazione chimica in NaOH (parti da 3 M per 2 minuti, ma funziona con concentrazioni molto molto pi¨ basse), che oltre a decondensare il DNA, lo distende, e puoi controllarne l'effettiva riuscita al microscopio a contrasto di fase (i nuclei diventano pallidi e aumentano la loro dimensione di 1-2 volte), prima di procedere alla FISH.
Se cerchi un protocollo puoi contattarmi...
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carlaorru
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37 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2009 : 08:39:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di carlaorru Invia a carlaorru un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sono riuscita a leggere solo ora la tua risposta (causa troppi impegni!). Grazie mille per le informazioni che mi hai dato ukitel. Nel caso avessi bisogno di altre info sul protocollo posso contattarti sempre qui? Buon lavoro e grazie ancora.
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