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Autore Discussione  

andreactf
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2009 : 22:52:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di andreactf Invia a andreactf un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se devo fare un clonaggio come faccio a decidere su quale primer (reverse o foward )devo mettere le sequenze riconosciute dagli enzimi di restrizione?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2009 : 23:17:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Le devi mettere su entrambi! Altrimenti ti si attaccherebbe solo un'estremità al vettore, a meno di non fare un clonaggio con una estremità blunt l'inserto tagliato e vettore tagliato devono essere complementari.
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Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi
Inserito il - 11 maggio 2009 : 23:23:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Le sequenze riconosciute dagli enzimi di restrizione vanno sia sul primer forward che reverse, altrimenti come faresti ad avere le due estremità coesive che ti sono necessarie? Meglio ancora se metti sequenze riconosciute da due enzimi di restrizioni diversi sui due primers, potendo effettuare un clonaggio direzionale, utile nel caso tu voglia far esprimere quello che cloni.


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andreactf
Nuovo Arrivato



5 Messaggi
Inserito il - 12 maggio 2009 : 09:04:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di andreactf Invia a andreactf un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
quindi uso un forward e un reverse su pcr per amplificare il segmento e poi lo tratto con enzimi di restrizione per avere estremità coesive che mi permettano di legarlo a un vettore? cosi torna? grazie tante
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi
Inserito il - 12 maggio 2009 : 18:24:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da andreactf

quindi uso un forward e un reverse su pcr per amplificare il segmento e poi lo tratto con enzimi di restrizione per avere estremità coesive che mi permettano di legarlo a un vettore? cosi torna? grazie tante

Si è così!
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