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Lilly
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
 Inserito il - 23 marzo 2006 : 22:54:10
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CIAO...IL METODO DEL 'SALTING AUT' PER L'ESTRAZIONE DEL DNA DA SANGUE VENOSO, PERCHè HA QUESTO NOME?? E LA SOLUZIONE DI IDRATAZIONE DEL DNA USATA A FINE METODICA, A COSA SERVE ESATTAMENTE? ANCORA UNA DOMANDA: IL DIMETILSOLFOSSIDO CHE FUNZIONE HA IN UNA REAZIONE DI AMPLIFICAZIONE?? GRAZIE MILLE!!!!! CIAO A TUTTI.
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2006 : 01:04:55
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il DMSO dovrebbe facilitare la separazione degli strand di DNA (soprattutto se ci sono strutture secondarie CG rich) in quanto disturba l'appaiamento fra le basi, ed in questo modo migliora la reazione di PCR.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2006 : 01:09:48
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Allora, la metodica si chiama "salting out" perchè aggiungi del sale per aumentare la forza ionica della fase acquosa e conseguentemente aumentare la solubilità del DNA.
Il DMSO viene a volte aggiunto alla reazione di PCR per aumentarne la resa. Tuttavia credo che concentrazioni troppo alte possano avere l'effetto contrario ed inibire la Taq. Sinceramente non ho idea del perchè migliori la resa! So che in alternativa alcuni aggiungono glicerolo o anche BSA... ma ancora una volta... non ho idea del razionale che ci sta sotto!
EDIT: ahah... AleXo mi ha preceduto e così ho scoperto come funziona il DMSO! grazie 
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cristiano
Nuovo Arrivato
Prov.: Novara
Città: novara
37 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2006 : 10:11:52
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| Il DMSO si puo' usare in associazione al glicerolo, appunto per 'risolvere' le strutture secondarie del DNA che si possono eventualmente formare. L'albumina serica bovina (BSA) ha invece la funzione di legare gli inibitori della Taq, si usa ad esempio con templati impuri |
CRI |
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pisola83
Nuovo Arrivato
28 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2006 : 23:46:53
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| io il DMSO non lo uso mai nelle PCR. metto solo del glicerolo perchè per quanto ne so io impedisce che il campione evapori formando quelle piccole bollicine internamente alle pareti e al tappo dell' eppendorf quando raggiunge le alte temperature nel termociclatore. poi non so. |
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virgiris
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: pozzuoli
19 Messaggi |
Inserito il - 09 maggio 2008 : 19:31:21
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| salve a tutti, volevo cortesemente sapere se qualcuno sa l'esatta azione del DMSO per quanto riguarda il criocongelamento, cerco qualcosa di abbastanza dettagliato, un link idoneo va benissimo uguale, grazie mille ciaooooooo |
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