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CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2009 : 18:16:39

ciao a tutti!
sto facendo delle transfezioni in cellule eucariotiche e sto usando il vettore pcDNA3.1 dell'Invitrogen con all'interno il mio gene di studio(una citochina), come vettore vuoto di controllo posso utilizzare il vettore gi� pronto pcDNA3.1 contenente solamente il gene reporter lacZ (visto che � gi� presente nel kit..)?
grazie

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1912 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2009 : 22:20:14

se l'hanno messo apposta,direi di si
ma essendo un vettore di espressione,cosa te ne fai se trasfetti anche quello con lacZ ?
cio� il controllo dovresti farlo su cellule non trasfettate ..a parer mio

Aaaaa ma non e' che lacZ ti serve come controllo nella trasformazione?

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 18:36:16

Forse non mi sono spiegato.. le cellule transfettate non sarebbero un controllo negativo, ma il vero contr negativo sono le cellule transfettate con il corrispondente plasmide vuoto(anzich� metterci il mio gene non ci metto nulla).
Ovviamente il plasmide contenente lacZ serve proprio come controllo della percentuale di transfezione, ma la mia domanda �:
Qualcuno ha mai usato il pcDNA con lacZ solamente come controllo negativo per verificare se la transfezione del vettore con il mio gene di interesse mi da un risultato diverso dalla transfezione con il solo vettore??

P.S. non posso usare il mio vettore senza inserto (pcDNA3.1 TOPO directional) perch� � linearizzato e non si richiude senza la presenza di un inserto..dovrei piuttosto acquistare un vettore vuoto circolare da un'altro kit.
Volevo usare il pcDNA3.1/lacZ perch� sarebbe gi� presente all'interno del kit.
Grazie infinite a tutti se potete aiutarmi

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 22:27:16

trasfettando il vettore con LacZ ti permette di verificare 2 cose:
1. l'efficienza di trasfezione
2. che la trasfezione di un plasmide che non esprime il tuo gene d'interesse non produce l'effetto biologico che vuoi studiare trasfettando il tuo gene.

quindi si, � un ottimo controllo, e per questo che � presente nel kit!

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 26 maggio 2009 : 22:51:18

Grazie Ivano ma il fatto � che praticamente tutti gli articoli che fanno transfezioni usano il vettore vuoto..

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