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Autore

Discussione

dani0087
Nuovo Arrivato

Prov.: Caltanisetta
Citt�: Riesi

4 Messaggi

Inserito il - 07 giugno 2009 : 16:34:49

Ciao a tutti,
sto studiando la boomerang pcr, da quello che ho capito devo tagliare il DNA con enzimi di restrizione che lasciano estremit� protruding. Devo poi costruiredegli adattatori con una parziale regione che puo formare un doppio filamento e con estremit� complementari a quelle protruding del DNA. ma a questo punto nn capsco piu come continura la pcr

. Ne sapete qualcosa

AIUTATEMI VI PREGO!!!!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 08 giugno 2009 : 00:07:32

Allora l'articolo originale dove � descritta la tecnica � questo: Vectorette, splinkerette and boomerang DNA amplification.
ma non so se hai accesso.

Comunque questa � la pagina dell'inventore della tecnica dove � scritto tutto per filo e per segno: Boomerang DNA Amplification.
Da questa ho preso questo schema:

In breve:
- il DNA viene tagliato con enzimi di restrizione
- si legano degli adattatori che hanno le 2 estremit� complementari ai siti di restrizione (sui 2 filamenti) e un loop centrale, in questo modo i due filamenti di DNA sono legati tra loro
- si amplifica utilizzando un solo primer, che replicher� il filamento a cui si appaia (come in una normale PCR) ma anche l'altro perch� sono attaccati dall'adattatore e la polimerasi prosegue
- a questo punto il primer si pu� attaccare anche al filamento neosintetizzato e amplifica anche quello
- ... e cos� via
si chiama boomerang proprio perch� la polimerasi fa avanti indietro sui 2 filamenti (legati) amplificandoli in sequenza.