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rubio
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Città: Roma


13 Messaggi

Inserito il - 11 giugno 2009 : 14:34:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di rubio Invia a rubio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!
sapete consigliarmi un protocollo per ottenere blocchetti in paraffina di campioni da topi gfp-transgenici senza perdere la specificità della fluorescenza?
con il criostato non riusciamo ad ottenere buone sezioni, si tratta di coclee, quindi materiale un pò ostico...
...se avete suggerimenti anche per il criostato ben vengano!!

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 12 giugno 2009 : 01:37:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Guarda se questo ti può essere utile!

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rubio
Nuovo Arrivato


Città: Roma


13 Messaggi

Inserito il - 12 giugno 2009 : 11:43:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di rubio Invia a rubio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ti ringrazio tanto, ma questo protocollo serve per vetrini da trattare con ab, io invece ho dei topi transgenici già fluorescenti in vita...e devo ottenere delle sezioni di coclea; con il criostato la fluorescenza rimane specifica ma le sezioni non sono buone, con la paraffina vengono buone sezioni ma la fluorescenza si diffonde altrove!
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8398 Messaggi

Inserito il - 12 giugno 2009 : 12:59:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da rubio

ti ringrazio tanto, ma questo protocollo serve per vetrini da trattare con ab, io invece ho dei topi transgenici già fluorescenti in vita...

no veramente il protocollo è quello che cerchi tu!
E' diviso in due parti, la prima intitolata: EGFP in paraffin: Direct visualization of fluorescence che è quello che serve a te
e la seconda: Immunostaining for EGFP on paraffin sections:, che è la marcatura con anticorpo.
Se segui il protocollo dal punto 1 al punto 4 dove dice:
Citazione:
4) Direct visualization of EGFP fluorescence: The blocks are sectioned at 3 - 5 microns, ....

... The slide is deparaffinized in three changes of absolute xylenes five minutes each and cover slipped using permanent mountant.

fino a qui e poi guardi al microscopio!

Comunque a quanto ne so la cosa importante è il tipo di fissazione per non perdere la fluorescenza specifica.

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rubio
Nuovo Arrivato


Città: Roma


13 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2009 : 12:09:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di rubio Invia a rubio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ah, già! scusa è che l'ho letto un po' di fretta! aggiungi poi il mio inglese perfetto!!
grazie grazie mille!
si infatti il problema anche secondo me è la fissazione, infatti al criostato la fluorescenza rimane specifica!
grazie mille ancora, proverò!
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