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LGlaura
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 15 giugno 2009 : 13:30:26
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Ciao a tutti,
avrei da porre un quesito.
Ho dei campioni di DNA estratto da sangue umano un pò di anni fa, ora lo dovrei utilizzare per studiare un polimorfismo. Devo ridosarlo x sicurezza e qualcuno mi ha suggerito di dosare sia a doppia elica che a singola (se fosse denaturato) e vedere il "rapporto"..ma cosa mi dovrei aspettare da questo "rapporto" e quanto deve essere?javascript:insertsmilie(' ')
grazie javascript:insertsmilie(' ')
Laura
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 13:55:36
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Scusa ho spostato il tuo post perché non c'entrava nulla con quello in cui l'avevi inserito.
Comunque io non ho mai dosato sia dsDNA che ssDNA, ma direi che se è degradato avrai un rapporto ssDNA/dsDNA maggiore.
Se è integro dovresti ottenere 0. In realtà però con una lettura spettrometrica non discrimini tra ssDNA e dsDNA l'assorbanza è la stessa, variano solo i conti, quindi sinceramente mi chiedo che senso abbia. 
Non so qualcuno l'abbia mai fatto e ti sappia dire qualcosa.
Io per valutare l'integrità del DNA preferisco seminarlo su gel, se è integro avrai una banda molto intensa che fa fatica ad uscire dal pozzetto, se è degradato vedrai uno smear.
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LGlaura
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 15:35:10
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Ciao, 
avevo pensato di usare il biofotometro per recuperarmi tutto il campione che leggo xchè ne ho poco, ma se la doppia lettura non mi da indicazioni di sorta lascio perdere questa strada..
grazie mille
Laura |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2009 : 16:19:58
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Beh il Biofotometro ti legge l'assorbanza a 260, 280 e 230.
Il valore di concentrazione del DNA (sia dsDNA che ssDNA come anche dell'RNA) lo calcola sull'assorbanza a 260 applicando la giusta conversione a secondo del coefficiente di estinzione molare.
Quindi non vedo proprio come tu possa discriminare in questo modo!
Per me non ha senso!
Al massimo chiedi a chi ti ha suggerito di farlo come intendeva che tu lo facessi.
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Rapporto ssDNA/dsDNA
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